第三细胞培养及其在中医药中的应用.ppt

六 细胞系或细胞株的命名 HeLa：为供体患者的姓名（来源于宫颈癌）CHO：中国地鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary） 宫-743：宫颈癌上皮细胞，1974年3月建立NIH3T3：美国国立卫生研究院（National Institute of Health）建立；每3天传代，每次接种3×105细胞／毫升。 七 细胞系或株的鉴定、管理和使用 ATCC入库细胞要求检测项目如下： 培养简历：组织来源日期、物种、组织起源、性别、年龄、供体正常或异常健康状态、细胞已传代数等冻 存 液：培养基和防冻液名称细胞活力：融解前后细胞接种存活率和生长特性培 养 液：培养基种类和名称（一般要求不含抗生素）、血清来源和含量 细胞形态：类型，如为上皮或成纤维细胞等，融解后细胞生长特性核 型：二倍体或多倍体，标记染色体的有无无污染检测：包括细菌、真菌、支原体、原虫和病毒等物种检测：检测同工酶，以证明细胞有否交叉污染以及反转录酶检测免疫检测：一两种血清学检测细胞建立者：建立者姓名；检测者姓名 第七节 细胞凋亡 细胞凋亡:是能量依赖的细胞内死亡程序活化而致的细胞自杀，由基因控制的细胞自主有序的主动死亡过程。 细胞程序性死亡： （programmed cell death，PCD）: 指生理性细胞死亡。描述在一个多细胞生物体中某些细胞死亡是个体发育中的一个预定的，并受到严格程序控制的正常组成部分。 细胞凋亡与坏死的区别 —————————————————— 坏死 凋亡 1.性质 病理性，非特异性 ,非遗传性 生理性或病理性，特异性 遗传性 2.诱导因素 强烈刺激（极端环境），随机发生 较弱刺激，非随机发生 3.生化特点 被动过程，无新蛋白合成， 主动过程，有新蛋白合成， 不耗能 耗能 4.形态变化 细胞结构全面溶解、破坏、 胞膜及细胞器相对完整 细胞肿胀 细胞皱缩，核固缩 5.DNA电泳 弥散性降解，电泳呈均一 DNA片段化（180-200bp）， DNA片状 电泳呈“梯”状条带 6.炎症反应 溶酶体破裂，局部炎症反应 溶酶体相对完整，局部无 炎症反应 7.凋亡小体 无 有 8.基因调控 无 有 常用细胞凋亡检测方法 细胞凋亡的形态学检测 磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 线粒体膜势能的检测 DNA片断化检测 TUNEL法 Caspase-3活性的检测 凋亡相关蛋白TFAR19蛋白的表达和细胞定位分析 细胞凋亡的形态学检测 磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V法） 磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中.Annexin-V是一种分子量为35～36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS高亲和力特异性结合。 碘化丙啶（propidine iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。 因此将Annexin-V与PI匹配使用，就可以将凋 亡早晚期的细胞以及死细胞区分开来 Annexin V-FITC