第五酶和细胞的固定化.ppt

* 固定化酶装入柱内，让样品通过酶柱后，用光化学或电化学方法测定流出液中底物的减少或产物的增加来监测反应速度，从而自动分析底物、辅酶、活化剂、酶抑制剂的含量。 * * 葡萄糖酶电极的敏感膜是葡萄糖氧化酶（GOD），它被固定在聚乙烯酰胺凝胶上。在酶膜的作用下葡萄糖发生氧化反应，消耗掉氧而生成葡萄糖酸和过氧化氢。通过用电极测量被消耗的氧或生成的过氧化氢就可了解葡萄糖浓度。 * 生物化学需氧量(BOD)定义为：在规定的条件下，微生物分解存在水中的某些可氧化物质，特别是有机物所进行的生物化学过程所消耗的溶解氧量。该过程进行的时间很长，如在20℃培养条件下，全过程需100天，根据目前国际统一规定，在20±1℃的温度下，培养五天后测出的结果，称为五日生化需氧量，记为BOD5，其单位用质量浓度mg/L表示。 BOD英文全称Biochemical Oxygen Demand，即生物需氧量。生化需氧量（BOD）是微生物在一定量的水体中生长所消耗的氧气的量，是一种环境监测指标，主要用于监测水体中有机物的污染状况。 * 肌苷, 次黄嘌呤肌苷，9-β-D-呋喃核糖基次黄嘌呤 * * * ?青霉素G酰化酶（Penicillin G amidase E.C.3.5.1.11），能催化水解青霉素G及其扩环物头孢G生产6-APA和7-ADCA。而6-APA和7-ADCA是半合成β-内酰胺类抗生素的两个重要中间体。青霉素G酰化酰也可以用于催化合成其他半合成青霉素和头孢菌素。 * * * 青霉素酰化酶转化流程图 用固定化青霉素酰胺酶连续生产6-氨基青霉素烷酸 (6APA)， 6APA 是合成青霉素的重要原料 ? 利用固定化酶来制造人工器官代替患病器官已越来越普遍。 ? 以往，治疗肾脏疾病，常使用血液透析装置，将患者血液输到体外，经过透析膜，使血液中的尿素、尿酸等代谢废物以扩散的方法除去。用这种透析机需要大量透析液，整个装置庞大笨重，且效率低，价格贵。 ? 而利用固定化脲酶制成透析液只有1.5L的新型人工肾，可除去血液中的代谢废物。 血液透析机 先将脲酶与离子交换树脂制成微小胶囊，再将胶囊与活性炭一起装柱，然后将柱和一个小透析器连接，利用定量泵使透析液循环。 透析液与血液接触后，尿素等由血液转移到透析液，透析液中的尿素在固定化脲酶作用下分解为NH3和CO2，由离子交换树脂吸附而除去。 透析液中尿素以外的代谢废物可由活性炭吸附而除去。 因此，此法可减小透析液用量，利用小装置，发挥高效能。 目前，具有部分器官机能的高效人工器官正成为人们研究固定化酶（细胞）的努力方向。 酶试纸的应用 将酶固定于纸片上，制成能测定某些物质的含量的试纸，用于诊断，非常简便、迅速。 例如葡萄糖氧化酶和过氧化物酶可以联合催化如下的偶联反应： 式中DH为还原性色素原，一般为邻联甲苯胺或邻联茴香胺，本身无色，氧化后则成为蓝色化合物。 将葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和邻联甲苯胺等还原性色素原固定在纸片上，就可制成定糖试纸。将其浸入待测溶液中，如存在葡萄糖，试纸则可呈现蓝色，根据试纸上蓝色的深浅，可判断葡萄糖多少，以此可检验尿液、血液中糖含量，作为糖尿病临床诊断依据，方法十分简便。 本章 目录 6. 细胞和原生质体的固定化 我们已知微生物产生的酶有胞外酶和胞内酶之分．在固定化胞内酶时，需要先将细胞破碎，再把酶提取出来，纯化处理，而且许多反应是利用微生物细胞内多种酶协同催化，需要分别固定，这样操作麻烦。 后来，发展了直接固定化微生物细胞，把微生物的复合酶系作为固定催化剂而加以利用． 固定化细胞需要的先决条件是： 要求底物和产物容易透过微生物的细胞膜， 没有产物的分解系统或副反应系统，或者说有这两种系统，但用热处理或pH处理等简单方法能使之失效， 一般固定化的细胞是死细胞或静止态细胞，只利用其酶活性． ? 例如：葡萄糖异构酶（白色链霉菌），是一种胞内酶。在50-80℃加热10分钟，使菌体自溶作用的酶失活，而葡萄糖异构酶仍然保持活性，长期使用酶活力不减少。 近年来发展到固定化可增殖的活细胞． 例如，琼脂包埋的酵母细胞数为106个／厘米2，在营养培养基里培养2天后细胞数可达109~1010个／厘米2 固定化活细胞，酶在完整的细胞中是稳定的，特别当反应需要辅因子时，固定化活细胞比固定化酶更为优越，因为活细胞能再生辅因子，固定化后催化活性没有明显损失，操作和贮藏的稳定性都好 ①物理吸附法 物理吸附法主要靠带电的微生物细胞和载体之间的静电相互作用． 各种微生物细胞如酵母和细菌已用吸附法被固定在不同的载体上，例如：硅藻土、陶瓷、玻璃和塑料上． 酵母一般带负电，在固定化时最好选择带正电的载体．例如在pH4条件下，酿酒酵母在陶瓷表面上的吸附程度最大，这时载