2动物细胞工程-第四章第二节细胞培养液.pptVIP

常用的合成培养基(液) (1)199培养基： 1950年为培养鸡胚细胞研制的。 199培养基含有多达69种成分。其组成成分虽然很多，但单独使用时只能维持细胞存活数天，在加入血清后可以维持很多种细胞的生长。 * 7．谷氨酰胺补充液 谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成培养基中都要添加。但由于谷氨酰胺在溶液 中很不稳定，4℃下放置7 d即可分解约50％。培养在4℃放置2周以上时，要重新加入原来量 的谷氨酰胺，故需单独配制谷氨酰胺溶液，以便临时加入培养液内。一般配制为100倍浓缩液， 配制时应加温至300c：，完全溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于一20℃。使用时，在每100 ml 培养液中加入0．5～2 ml谷氨酰胺干液，终浓度为1～4 mmol／L。 开始的配方特别适合悬浮细胞的生长，主要针对淋巴细胞，后经几次改良从RPMI1630、1634.而至 第四章 细胞培养液 培养液是模拟细胞在体内生存的生理环境，是维护组织细胞生存、生长及进行细胞培养各项操作中所需的基本液体。 4.2.1 细胞培养的常用液体 高纯化水：蒸馏水（密封，短储） 离子交换水（含有有机物） 胶原酶溶液 C6H14N2O2 7.谷氨酰氨培养液 谷氨酰胺在细胞代谢过程中起重要作用，合成培养基中都要添加。 一般配制为100倍浓缩液，配制时应加温至30℃，完全溶解后过滤除菌，分装至小瓶，储存于-20℃。使用时，在每100 ml培养液中加入0．5～2 ml谷氨酰胺母液，终浓度为1～4 mmol/L。 谷氨酰胺在溶液中不稳定，4℃放置7天可分解50%，两周以上要重新加入原来量的谷氨酰胺。 1.培养基的基本要求 4.2.2 培养基 （L-精氨酸、胱氨酸、组氨酸、络氨酸） ，浓度：5--20%，常用10%。 血清来源：牛血清（胎牛血清、新生牛血清、小牛血清） 马血清、鸡血清、兔血清、羊血清、人血清等 血清的不同批号含有不同的成分，所以许多人发现，应该在使用前对血清进行测试。 大多数试剂商提供样品，所满意的批号即可选用，这样可以一次得到足够一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加热30分钟，这一过程称为灭活。  序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 1 无水氯化钙 185.00 31 维生素 D 2 0.010 2 硝酸铁 .9H 2 O 0.72 32 氯化胆碱 0.500 3 氯化钾 400.00 33 叶酸 0.010 4 无水硫酸镁 97.67 34 肌醇 0.050 5 乙酸钠 50.00 35 维生素 K 0.016 6 氯化钠 6800.00 36 烟酰胺 0.025 7 无水磷酸二氢钠 122.00 37 烟酸 0.025 8 L-丙氨酸 50.00 38 对氨基苯甲酸 0.050 9 L-盐酸精氨酸 70.00 39 泛酸钙 0.010 10 L-门冬氨酸 60.00 40 盐酸吡哆醇 0.025 11 L-盐酸半胱氨酸 0.11 41 盐酸吡哆醛 0.025 12 L-盐酸胱氨酸 26.00 42 维生素 A醋酸盐 0.100 13 DL-谷氨酸 133.60 43 核黄素 0.100 14 L-谷氨酰胺 100.00 44 盐酸硫胺 0.010 15 甘氨酸 50.00 45 D 2 -磷酸生育酚钠盐 0.010 16 L-盐酸组氨酸 21.88 46 硫酸腺嘌呤 10.00 17 L-羟脯氨酸 10.00 47 腺嘌呤三磷酸 1.00 18 DL-异亮氨酸 40.00 48 腺嘌呤一磷酸 0.2385 19 DL-亮氨酸 120.00 49 胆固醇 0.200 20 L-盐酸赖氨酸 70.00 50 脱氧核糖 0.500 21 DL-甲硫氨酸 30.00 51 葡萄糖 1000 22 DL-苯丙氨酸 50.00 52 还原谷胱甘肽 0.050 23 L-脯氨酸 40.00 53 盐酸鸟嘌呤 0.300 24 DL-丝氨酸 50.00 54 次黄嘌呤 0.300 25 DL-苏氨酸 60.00 55 吐温 80 5.00 26 DL-色氨酸 20.00 56 核糖 0.500 27 L-酪氨酸.钠盐 57.66 57 胸腺嘧啶 0.300 28 DL-缬氨酸 50.00 58 尿嘧啶 0.300 29 维生素 C 0.0566 59 黄嘌呤钠盐 0.300 30 D-生物素 0.010 60 酚红 20.00 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 序号 化合物名称 含量 (mg/L) 1 无水氯化钙 .2H 2 O 265.00 18 L-丝氨酸 42.00 2 硝酸铁 .9H 2 O 0.10 19 L-苏氨酸 95.00