青霉素发酵技术15摇瓶种制作及培养(六步教学法).docVIP

教 案 首 页 授课顺序 学时 日期 年 月 日 班级 课题 1.5 摇瓶种制作及培养 学习目标 学生通过查阅整理资料，结合教师讲解，学生能够理解实验室摇瓶培养原理；掌握摇瓶培养步骤；熟悉摇瓶种制作和培养工艺中的主要设备；掌握摇瓶种制作的主要工艺；熟悉摇瓶种制作中涉及的主要参数。 主要内容 （1）实验室摇瓶培养原理 （2）摇瓶培养步骤 （3）摇瓶种制作主要工艺 （4）摇瓶种制作设计的主要设备 （5）摇瓶种制作主要参数 教学过程 1、资讯 → 2、计划 → 3、决策→ 4、实施 → 5、检查 → 6、评价 教具或工具 工作任务单、多媒体设备、灭菌锅、显微镜、超净工作台等 载体 产黄青霉培养物 考核与评价 采用工作任务单上的考核表进行评价，将评价结果记入期末总成绩，并填写教师评语部分。 轻工职业技术学院 教 案 NO 1 课程 《青霉素发酵生产技术》 201 /201 学年第 2 学期 教师 授课日期 班 级 工作过程：青霉素发酵生产技术 教学任务1.3：产黄青霉菌株的平皿培养及菌种检测 知识目标： （1）了解青霉素的分类及分子结构、作用机理应用等。 （2）掌握青霉菌在固体培养基形态特征 （3）熟悉青霉素产生菌生长发育过程 （4）熟悉产黄青霉菌的特点 （5）掌握大米孢子的制备方法。 （6）掌握青霉菌菌种的保藏 （7）掌握青霉菌的直接制片观察法 （8）熟悉母瓶斜面固体培养基配方 （9）掌握种子质量要求 技能目标： （1）能配制察氏斜面培养基 （2）会使用高压蒸汽灭菌锅 （3）学会无菌操作 （4）会斜面划线接种产黄青霉菌株 （5）学会使用恒温培养箱 （6）会制备大米培养基 （8）会配制乳酸石炭酸棉蓝染色液 （9）会配制50%乙醇 （10）会青霉菌直接制片 （11）能正确使用显微镜 （12）会制备菌悬液（供冻干用） （13）学会操作小型冻干机 （14）会使用高频火花真空测定器测定冻干菌种真空度 重点难点： （1） 青霉菌插片制片观察（2）青霉菌形态的准确鉴定（3）产黄青霉菌株保存 教学方法： “课堂，实训一体化”的现场教学方法；项目导入教学法。 考核方法：组内自我评分和组间互评、实施过程评分、实验结果评分。 学时安排：设计方案2学时、组织实施2学时 教学札记： 编写日期： 轻工职业技术学院 教 案 附 页 教学组织 一、分组 学生全部进入发酵室后，将其分为7组，各组组长兼任安全员、副组长兼 任设备材料员，达到学生的自管自治和相互监督，学生与教师的高度配合。 二、工作过程导入（资讯） 教师通过ppt向学生展示青霉菌液体摇瓶培养物，提出问题： 大家想，由试管到茄子瓶培养物、再到液体摇瓶培养有什么变化？ 学生回答…… 引导学生：容器大小？菌丝形态？产黄青霉生长数量？投入生产后生长扩增速度及进入合成代谢所需时间？最后得出结论。 在生产车间阶段，最终一般都是获得一定数量的菌丝体。 菌丝体比孢子要有利： 1、缩短发酵时间（产黄青霉深层发酵一般仅需2-7d就可获得大量的菌丝体，而固体培养则需30-60d。） 2、有利于获得好的发酵结果 霉菌：生长较慢，如青霉菌，一般采用三级发酵 孢子悬浮液→一级种子罐（27?C,40小时孢子发芽，产生菌丝，50-100L ）→二级种子罐（ 27?C,10~24小时，菌体迅速繁殖，粗壮菌丝体，500-1000L）→发酵罐 继续引导学生思考： 我们在实验室自己如何能获得青霉菌液体摇瓶培养物？ 附1：摇瓶种制作的原理 产黄青霉摇瓶种制作是在发酵罐中，采用液体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶氧含量，提供产黄青霉菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获得大量的菌丝体或代谢产物。 为何用三角瓶？通气问题怎么解决？装液量多少？ 液体培养基如何制作，接种量多少（还用孢子悬液吗）？ 通过孢子计数来获得一粒大米的孢子数量，然后称量大米的克数及相应米粒数量，来推知其整体所含孢子数，来确定单位体积培养液的接种量(1粒米含1.4×106个孢子，接种量为200亿孢子/吨) 。 得到的培养物能否检测其生长量？（答案是肯定的） 一般用菌体浓度来反映培养液里菌丝生长量，通过溶液比浊度或单位体积菌丝体干重的测定来反映菌体浓度。 三、教学任务导入（资讯） 要求学生快速浏览青霉素发酵学习指导书上的参考资料，并提炼出液体摇瓶种培养制备的关键技术点，从而让学生建立对该工作过程的感性