紫外分光光度法測定灵芝孢子粉多糖实验报告.docVIP

紫外分光光度法测定多糖含量的方案 实验参与人员：实验进行的时间：一 实验目的 建立多糖的含量测定的方法。 操作步骤 1 对照品溶液的配制： 取无水葡萄糖约1mg，精密称定，置于10ml容量瓶中，加蒸馏水定容，摇匀，加甲醇定容，制得对照品贮备溶液。 药材 取样量（mg） 稀释的体积（mL） 浓度（mg/mL） 无水葡萄糖 100001 10 1.0000 2 测定波长的选择： 加显色剂的空白溶液：精密称取苯酚约0.5g，用100ml蒸馏水定容。 对照品溶液：密量取对照品溶液0.5ml于10ml刻度试管中加入1.0ml的5%苯酚溶液迅速加入7.0ml浓硫酸加蒸馏水至刻度振摇5min置沸水浴中30min再冷水浴10min即的。测定：在可见光区200—700nm内对三份溶液进行扫描，确定显色剂是否影响吸光度，确定对照品溶液的最大吸收波长。 图1：空白、显色剂、无水葡萄糖对照品溶液显色后的全波长扫描光谱 3 供试品溶液的制备方法考察 取灵芝孢子粉粉末（过四号筛）0.5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加水90ml，加入回流3h，放冷，摇匀，精密量取0ml，加入乙醇150ml，摇匀，4℃放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解并转移至ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，为供试品溶液。 4 标准曲线的绘制 精密吸取对照品溶液0.1ml，0.15ml，0.20ml，0.25ml，0.3ml分别置于试管中，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml浓硫酸，加蒸馏水至刻度，振摇5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，以蒸馏水为空白对照，在最大吸收波长处测定各溶液吸光度。以对照品质量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。样品编号 取用量（mL） 吸光度 1 0.2054 2 1.5 0.4079 3 2.0 0.6178 4 2.5 0.8237 5 3.0 0.9878 5 方法学考察5.1精密度试验 取标准曲线项下无水葡萄糖对照品溶液制备的样品，在最大吸收波长处连续测定吸光度6次，求出RSD。样品编号 吸光度A 平均吸光度A SD RSD% 1 0.4097 0.4018 0.0057 1.42 2 0.4056 3 0.4011 4 0.3983 5 0.3933 6 0.4026 5.2稳定性试验 取药材，精密称按供试品制备方法制备溶液，精密量取该供试品溶液0.5ml，加入1.0ml的5%苯酚溶液，迅速加入7.0ml浓硫酸，加蒸馏水至刻度，振摇5min，置沸水浴中30min，再冷水浴10min，在反应后10min，15min，25min，35min，45min，60min，在最大吸收波长下测定吸光度,求RSD值。编号 时间间隔min 吸光度A 平均吸光度A SD RSD% 1 5 0.5022 0.4973 0.0046 0.94 2 15 0.4982 3 25 0.4954 4 35 0.5006 5 45 0.4891 6 60 0.4984 5.3重复性试验 药材约g，精密称定，分别精密量取6份供试品溶液0.ml，供试品制备方法制备溶液，在最大吸收波长下测定吸光度，按测定数据求出多糖含量，并求算平均含量和RSD。样品编号 量g 吸光度A 含量mg 平均含量mg SD RSD% 1 0.5019 0.5012 5.19 5.20 0.04 0.77 2 0.5023 0.5093 5.25 3 0.5020 0.5053 5.22 4 0.5023 0.5089 5.25 5 0.5025 0.4978 5.16 6 0.5023 0.4976 5.16 5.4加样回收率试验 精密称取同一批号的样品约0.5g，共6份，分别精密加入对照品储备液ml，按照供试品制备方法制备溶液，照标准曲线制备项下的方法，依法显色，测定吸光度，按测定数据求出各自的多糖含量，并得到回收率及RSD。编号 取样量g 原有量mg 加入量mg 吸光度A 测得量mg 加样回收率% 平均加样回收率% SD RSD% 1 0.2534 2.595 2.5 0.5022 5.1946 103.984 101.17 1.86 1.84 2 0.2567 2.593 2.5 0.5032 5.2022 100.19 3 0.2586 2.598 2.5 0.5064 5.2265 101.14 4 0.2544 2.574 2.5 0.5087 5.2439 102.79 5 0.2555 2.592 2.5 0.5012 5.1871 99.3