細胞生物学重点.docVIP

绪论 细胞学（Cytology）：细胞学就是研究细胞的结构、功能和生活史的科学。 细胞生物学(cell biology) ：细胞生物学是以细胞为研究对象, 从细胞的整体水平、亚显微水平、分子水平等三个层次，以动态的观点, 研究细胞和细胞器的结构和功能、细胞的生活史和各种生命活动规律的学科。 分子细胞生物学(molecular biology of the cell) ：以细胞为对象, 主要在分子水平上研究细胞生命活动的分子机制。 细胞学说的三个基本内容？ 1. 所有生物都是由一个或多个细胞组成的。 2.细胞是构成生物的结构与功能的基本单位。 3.细胞只能来源于细胞的分裂。 为什么说细胞是生命的基础？ A. 细胞是构成生命的基本单位，所有的生物都由细胞组成。 B.细胞是生物的基本功能单位，所有的代谢活动都是由细胞完成的。 C. 细胞是遗传与生殖的基础。 D. 细胞是生物生长与发育的基础。 E. 细胞(nucleus)具有全能性，它可以产生一个具有同样遗传特性的新个体。 细胞的基本特点？ A.细胞是高度复杂的，具有组织及自我调节能力，可能获得及利用能量。 B.所有细胞都具有同样相似的结构、组成及代谢特性：质膜， DNA/RNA, 及核糖体。 C.细胞能产生更多的个体，甚至可以长期在体外繁殖及培养。 D.细胞可以通过表面受体对外界环境产生应激。 细胞生物学研究方法 进行初步观察2.形成可验证的假说3.设计对照试验4.收集资料5.解释结果6.作出合理结论 一、离心技术 1.差速离心 ：介质密度均一；速度由低向高，逐级离心。 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。 可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 密度梯度离心 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力场的作用使细胞分层、分离。 类型：速度沉降、等密度沉降。 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 （1）、速度沉降 介质密度梯度平缓，分离物按各自的沉降系数以不同的速度沉降而达到分离。 （2）.等密度沉降 样品各成分在连续梯度的介质中经过一定时间的离心则沉降到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的成分分离。 二、流式细胞术 包在鞘液中的细胞通过高频振荡控制的喷嘴，形成包含单个细胞的液滴，在激光束的照射下，这些细胞发出散射光和荧光，经探测器检测，转换为电信号，送入计算机处理，输出统计结果，并可根据这些性质分选出高纯度的细胞亚群 三、细胞电泳 各种细胞或处于不同生理状态的同种细胞荷电量有所不同，能在外加电场的作用下发生泳动而分离不同种类的细胞。 如何提高光学显微镜的分辨能力? 增大镜口率； 使用波长较短的光线；增大介质折射率。荧光显微镜和普通显微镜有什么主要区别照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上； 光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜； 有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。 什么是电镜负染技术就是用重金属盐如磷钨酸或醋酸双氧铀对铺展在载网上的样品进行染色；吸去染料，样品干燥后，样品凹陷处铺了一薄层重金属盐，而凸的出地方则没有染料沉积，从而出现负染效果。什么是电镜冰冻蚀刻（freeze-etching）技术亦称冰冻断裂（freeze-fracture）。标本置于干冰或液氮中，进行冰冻。然后用冷刀骤然将标本断开，升温后，冰在真空条件下迅即升华，暴露出了断裂面的结构。冰升华暴露出标本内部结构的步骤称为蚀刻（etching）。蚀刻后，再向断裂面上喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶掉，把膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。复膜显示出了标本蚀刻面的形态，可置于电镜下观察。电镜下的影像即代表标本中细胞断裂面处的结构。 免疫荧光技术： 快速、灵敏、有特异性，但其分辨率有限 （图） 蛋白电泳(SDS) 与免疫印迹反应(Western-Blot) 免疫电镜技术： ?免疫铁蛋白技术 ?免疫酶标技术 ?免疫胶体金技术 应用：通过对分泌蛋白的定位，可以确定某种蛋白的分泌动态；胞内酶的研究；膜蛋白的定位与骨架蛋白的定位等 细胞内特异核酸的定位与定性： 光镜水平的原位杂交技术（同位素标记或荧光素标记的探针） ?电镜水平的原位杂交技术（生物素标记的探针与抗生物素抗体相连的胶体金标记结合）?PCR技术 （一）动物细胞培养 群体培养（mass culture）：将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中，让细胞贴壁生长，汇合（confluence）后形成均匀的单细胞层； 克隆培养（clonal culture）：培养高度稀释的细胞悬液，细胞贴壁生长，每一个细胞形成一个细胞集落，称为克隆。 转鼓培养