細胞生物学实验指导讲义.docVIP

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細胞生物学实验指导讲义

实验一 细胞的基本形态结构的观察 实验原理与目的 通过观察动、植物细胞,了解细胞形态的多样性并掌握光镜下细胞的基本形态结构。 初步掌握临时制片技术和显微绘图的方法。 实验原理 细胞是生命活动的基本结构单位和功能单位。构成人体或其他高等动物或植物的细胞种类繁多,形态各异。细胞的形态都与它们的功能相适应。如具有运输O2和CO2功能的红细胞为双凹盘状;具有感受刺激与传导功能的神经细胞呈星芒形,附有长短不等的树枝状突起;上皮细胞是柱形或扁平形;巨噬细胞则呈不规则形状,并能伸出伪足,以利于为执行吞噬和消灭外源的病原微生物的功能。虽然细胞在形态上多种多样、大小不同,但却具有共同的基本结构特点,即都是由细胞膜(cell membrane)、细胞质(cytoplasm)和细胞核(nucleus)组成。 实验用品 1.器具:显微镜、载玻片、盖玻片、推片、吸管、镊子、牙签、擦镜纸、吸水纸、小剪刀。 2.材料:洋葱、人口腔上皮细胞、鸡血液、人血细胞涂片、蟾蜍血细胞涂片。 3.试剂:2 %碘液、Giemsa 染液。 试剂配制 1.2 %碘液:称取碘片2g,碘化钾5g,蒸馏水100ml 混匀溶解即可。 2.吉姆萨(Giemsa) 染液:吉姆萨粉(Giemsa stain) l.0g 甘油(AR) 66ml 甲醇(AR) 66ml 将Giemsa粉放入研钵中,先加入少量甘油,研磨至无颗粒为止,然后再将全部甘油倒入,放56℃温箱中2h后,加入甲醇,将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃保存)。 内容与方法 一、洋葱鳞茎表皮细胞制片与观察: 1. 临时制片:取一擦净的载玻片,在玻片中央滴一滴2%的碘液,将洋葱茎用小刀分为几块,取一块肉质鳞叶,用镊子在其表面轻轻撕下一小块膜质表皮,再用剪刀剪成3~4mm2的小块,置于载玻片的染液中铺平,染色2~3分钟,盖上盖玻片,用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。2. 观察:将标本置于低倍镜下观察,可见许多长柱状排列整齐、彼此相连的细胞,选择其中较典型的细胞移至视野中央,然后换成高倍镜观察以下结构: 1)细胞壁:在每两个细胞相连处,可看到二层壁状结构,是相邻细胞各自的细胞壁,有纤维素构成。细胞膜紧贴在细胞壁内侧,不易看到。 2)细胞核:呈椭圆形,位于中央,被染成黄色,成熟的细胞由于液泡的挤压,核位于质膜边缘。细胞核一般有1~2个折光较强并染成黄色的核仁。 (3)细胞质:是细胞膜以内,细胞核以外的物质,染色较浅,有1至数个液泡及微细颗粒(图1 - 1)。 二、人口腔粘膜上皮细胞制片与观察: 1.临时制片:在一张擦净的载玻片中央滴一滴2%的碘液,取一根牙签,用其粗端在自己口腔中的脸颊上刮几下,将其刮下的粘膜上皮细胞涂布在碘液中,染色2~3分钟,盖上盖玻片,用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。 色2~3分钟,盖上盖玻片,用吸水纸吸去盖玻片周围多余的染液。 2. 观察:将制好的玻片标本置于低倍镜下观察,可见细胞被染成黄色,成群或分散存在。由于该细胞体积较小,着色较淡,观察时应稍降低视野中的亮度,选择较分散且轮廓清楚的细胞移至视野中央,换成高倍镜观察以下结构。 1)细胞膜:是包围在细胞最外层的膜状结构,细胞呈扁平不规则的类圆形,细胞膜有些地方出现皱褶。 2)细胞核:圆形或椭圆形的细胞核呈深黄色位于细胞中央,核中有时可见一致密的结构,即为核仁。 3)细胞质:是细胞膜与细胞核之间染色较浅的物质(图1 – 2; 图1-3)。 2. 观察:将已经染好的血涂片标本(肉眼可见血膜呈粉红色)放置在低倍镜下,检查整个血涂片,选择细胞均匀分布、较少重叠的区域,然后转换高倍镜下仔细观察,在人的血涂片上红细胞数目多、体积小、呈圆饼状,无细胞核(图1-4),胞质呈粉红色;白细胞比例较小,寻找较困难,但胞体较大,细胞核明显,形态多样,呈兰紫色。鸡的血细胞、蛙的血细胞的形态与人类有很大不同,在鸡或蛙血的红细胞涂片中,可见红细胞呈卵圆形,并且有椭圆形的细胞核(图1-5)。 图1-4 人血红细胞的形态?? 图1-5鸡血红细胞的形态 作业与思考题 1.绘制高倍镜下洋葱鳞茎表皮细胞、人口腔黏膜上皮细胞图,并注明各部分结构的名称。 2.生物绘图的基本要求是什么? 实验二 细胞大小的测量 实验目的 学习显微测量方法 实验原理 应用显微镜的成像原理,同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺,两尺配合使用,进行测量和运算,得出细胞的大小。(目镜测微尺测量倍率比照表) 实验材料、用品 材料:人口腔上皮细胞, 鸡血红细胞、洋葱鳞叶表皮细胞。 仪器(请参看仪器图库):测微尺、显微镜。 物镜测微尺 目镜测微尺 实验步骤 测

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