禽流感細胞灭活苗的研究及H9亚型.pptVIP

禽流感细胞灭活苗的研究及H9亚型禽流感病毒感染猪的血清学调查 报 告 内 容 研究背景: 文献综述 禽流感细胞灭活疫苗的研究 H9亚型禽流感感染猪的血清学调查 2.1 研究的目的和意义 灭活疫苗安全性好，免疫原性强，给免疫鸡群提供良好的免疫保护。目前已得到广泛的应用。 细胞苗与传统的鸡胚苗相比，抗原性更接近自然流行株，可减少宿主蛋白成分，减少变态反应，避免鸡胚传代后引起抗原性变异。 本试验将禽流感病毒H5N1接种MDCK细胞，通过收获细胞病变液经灭活制成细胞灭活疫苗，为HPAI的防控提供新的疫苗储备。 2.2 试验方法、结果与分析 敏感细胞株的筛选 禽流感病毒接种MDCK细胞后20～36h开始出现呈现明显的细胞病变 正常的MDCK 细胞排列整齐，界限清晰 病变的细胞变圆，脱落、颗粒增多，成片细胞之间有丝相连，成“ 拉网” 结构 。 稳定、高效价病毒毒株的筛选 病毒增殖滴度的研究 病毒的灭活及灭活效果检验 灭活：以终浓度为0.4％的甲醛溶液灭活。 灭活检验：将灭活的病毒液接种9～10日龄鸡胚，盲传3代后，全部鸡胚发育正常。说明病毒灭活彻底，保证了疫苗的生物安全。 疫苗的安全性试验 安全性试验：用制备的细胞灭活苗双倍剂量接种28日龄H5-AIV抗体阴性鸡10只，0.4mL/只，鸡群未出现异常反应和局部损伤。说明所制备的细胞苗安全性良好。 疫苗的免疫保护力试验 结果表明，各免疫组鸡全部健活，保护率为100%。空白对照组鸡攻毒后24h开始出现精神萎靡、流泪、呼吸困难、颜面水肿、羽毛松散等症状，并出现死亡，在5天内全部死亡。 说明研制的H5亚型禽流感病毒细胞灭活苗免疫效果良好，与尿囊液灭活苗和禽流感灭活苗（N28株，哈兽研）的免疫保护率相当，可以对同亚型的病毒攻击起到保护作用。 保存期试验 2.3 小结 本试验筛选了MDCK细胞和DW毒株A/Chicken/HuBei/327 /2002(H5N1)为本试验制苗用细胞系和毒株。 研制了H5亚型禽流感细胞灭活苗，并对其免疫效果进行了评价，该疫苗对同亚型病毒的攻击能提供100%保护。抗体持续时间达到9个月， 4 ℃保存期为10个月。 3.1 研究的目的和意义 禽流感已突破种属障碍感染人并致人死亡。H9N2在猪中也分离到，且能直接感染人。 猪是禽流感病毒和其他流感病毒的混合器，在禽－猪－人的种间传播中起到非常重要的作用。 做好对猪群的监测，建立一套早期预警体系，即可提前预报流感大流行。 本实验利用建立的H9HA-ELISA诊断方法，对来自湖北、湖南和安徽三省的949份猪血清进行了血清学分析。 技术路线 H9-HA蛋白SDS结果 ELISA抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 ELISA阴阳界限的确定 将临床送检经HI检测为阴性的100 份猪血清，进行ELISA检测均为阴性，计算该100份血清的OD630nm平均值X=0.143，标准差SD=0.087，因而根据公式X+3SD求得阴阳界限为0.404。 结果判定：以空白孔调零，在酶标仪上测各孔OD630nm值 OD630nm≥0. 404判为阳性； OD630nm＜0.404判为阴性。 重复性试验 分析特异性试验 诊断特异性、敏感性与符合率试验 猪的血清学调查 检测猪血清949份，总阳性数为46份，阳性率为4.8%。各地都检测到一定的阳性率。 多数猪场只检测到1、2头阳性，说明只是有零星感染。 三省2-3月份的阳性率均高于9-10月份，这与初春季节天气寒冷有关。 从哺乳仔猪到种猪的阳性率基本呈上升趋势。 3.3 小结 利用表达的HA蛋白，建立了用于诊断猪H9亚型禽流感抗体的ELISA诊断方法。 利用建立的ELISA方法对2005年2-3月份、9-10月份期间来自湖北、湖南、安徽地区的949份送检猪血清进行检测，抗体总阳性数为46份，总阳性率为4.8%。 血清学检测结果表明，初春抗体阳性率比夏末秋初时的高，这与初春季节天气变化快、气温较低有关，与流感流行规律一致。 结果我们可看出年龄大的猪抗体阳性率相对较高，随着年龄的增长其体内抗体逐渐得到积累，也有可能存在交叉感染。 湖北、湖南、安徽三地均检测出一定的抗体阳性率，由于这些猪场未注射过H9-禽流感疫苗，其阳性率反映了猪群受H9-AIV的污染程度，但只是零星感染，尚未形成流行。 感谢导师金梅林教授和陈焕春院士在学习、和工作上给予我的谆谆教诲。 感谢流感组 感谢实验室的所有老师和同学！ 414 261 153 合计 247 236 11 － 167 25 142 ＋ ELISA － ＋ 合计 血凝抑制试验（HI） 根据公式计算得该ELISA方法的诊断敏感性为