流式演示文稿2010研究生.pptVIP

补偿前后模型图 数据处理： 直方图：显示一个参数与细胞之间的关系。 每一个细胞单参数的测量数据可以整理成统计分布，以直方图的方式来显示。在图中，横坐标表示荧光信号或散射光信号相对强度的值，其单位是道数，可以是线性（line）或者对数（log）。纵坐标是细胞数。 2N代表G0/G1期细胞，4N代表G2/M期细胞，两者中间代表S期细胞。这是以2倍体和4倍体细胞为主的流式DNA图。 DNA周期检测中的死亡和凋亡 图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞。 散点图： 散点图常被用来分析多参数数据，如CD4、CD8、CD34、CD45等分子的表达，以及凋亡周期特异性，早期凋亡的检测等 细胞凋亡的检测结果：横坐标是Annexin-V FITC, 纵坐标是PI，右上象限代表死亡的细胞，左下象限是存活的细胞，右下象限是凋亡的细胞。 双染色区分凋亡和死亡的细胞 Annexin V-FITC/PI染色右上角表示：坏死＋晚期凋亡 在实际应用中，可根据需要选择匹配，以便了解和获得尽可能多的有用信息。 流式细胞仪的常用技术参数　 为了表征仪器性能，往往根据使用目的和要求而提出几个技术参数或指标来定量说明。 1.荧光分辨率 2.荧光灵敏度 3.适用样品浓度 4.分选纯度 5.分析测量参数 （1）荧光分辨率：强度一定的荧光在测量时是在一定道值上的一个正态分布的峰，荧光分辨率是指两相邻的峰可分辨的最小间隔。通常用变异系数（C.V值）来表示。 （2）荧光灵敏度：反映仪器所能探测的最小荧光光强的大小。一般用荧光微球上所标可测出的FITC的最少分子数来表示。目前仪器均可达到1000左右。 （3）分析速度/分选速度：仪器每秒种可分析/分选的数目。一般分析速度为5000～10000；分选速度掌握在1000以下（300/s）。 （4）样品浓度：主要给出仪器工作时样品浓度的适用范围。一般在105～107细胞/ml的数量级。 （5）分析测量参数 : FSC,SSC,FL1,FL2,FL3,FL4、 FL2- A, FL2- W及线性和对数测量模式。 常用流式软件 1.cellquest cellquest是BD公司推出的针对流式的试验数据获取和分析软件。界面友好，操作简单，是目前流式相关软件中应用最多的软件之一。 获取：建立检测模板（选测样通道、设“门”、作象限图、直方图），调节探测器和确定放大器测量模式可使所需信号出现在二维点图的适当位置。（颗粒通过激光束时产生光信号，然后转换成电信号，并在点图上相对应于一个道值）。 分析：建立分析模板（设“门”、作象限图、直方图），经数学统计后得到分析结果。 设门的概念 所说的设门，是指在进行检测时，所设的选择区域，可以用“门”选择感兴趣的细胞群。（设门技术比较复杂，染色和上机都需要操作人员有一定的经验）。 数据分析 * 流式细胞仪 2010年3月 流式细胞仪简介 流式细胞仪（Flow Cytometry, FCM）是检测细胞各种成分的重要细胞生物学工具。定量检测细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成分；研究细胞的各种功能状态(细胞增殖，细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、氧化还原状态、吞噬性等)；测量细胞或亚细胞结构的新型分析技术和分选技术。 主要包括了样品的液流技术、计数技术和细胞的分选，以及数据的采集和分析技术等。 BD FACSCalibur流式细胞分析仪 COULTER MAXM血细胞流式分析仪 美国  流式细胞分析仪 德国  流式细胞仪的特点： ①测量速度快。最快可在1秒种内计测数万个细胞； ②可进行多参数测量。可以对同一个细胞做有关物理、化学特性的多参数测量，并具有明显的统计学意义； ③是一门综合性的高科技技术。它综合了激光技术、计算机技术、流体力学、细胞化学、图像技术等多领域的知识和成果； ④既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。 流式细胞仪的构造 流式细胞仪主要由五部分组成 1.流动室和液流系统； 2.激光源和光学系统； 3.光电管和检测系统； 4.计算机和分析系统； 5.细胞分选系统 1.流动室的基本结构 流动室是仪器的核心部件，被测样品在此与激光相交，得到准确的细胞荧光信息。 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，鞘液包裹着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包裹下单行排列，依次通过检测区域。 液流驱动系统 进样速率： 改变样本的进样速率开关，可提高采样分析的速度，但是，这并不是提高样本的速度，而是改变了细胞的距离（整个系统运行中流速