第五章三帖皂甙类制剂的分析.pptVIP

薄层色谱鉴别 皂苷元： 极性较小，亲脂性强，吸附、分配薄层均可。 用硅胶为吸附剂，则要求展开剂的亲脂性强。 适合于皂苷元常用展开剂有：环已烷-EtOAC(1:1), C6H6-EtOAC(1:1), CHCl3-EtOAC(1:1), CHCl3-EtOEt(1:1), C6H6-EtOH(17:3)。 常用的显色剂 ①25％磷钼酸乙醇液：喷后140℃,△5～10min,皂苷元紫蓝色。 5 ％磷钼酸乙醇液：喷后105℃,△5～10min，皂苷元紫蓝色 ②、三氯化锑的浓盐酸或氯仿液: 喷后90℃,△10min，各皂苷元呈不同颜色。 ③、硫酸-甲醇液(1:1): 喷后△，显红褐、紫、黄或黑色。 与加热温度有关。缺点是腐蚀性强,其他物质也显色。 ④、氯磺酸-乙酸(1:２)溶液: 喷后130℃,△５min，各皂苷元呈不同颜色。如天蓝、粉红等,且在紫外光下也呈不同萤光，较灵敏（可检出１０－１～１０－３ug）,可用于鉴别和定量。 ⑤、碘蒸汽:灵敏度约为１～２ug，优点碘易挥发，显色后挥去碘，斑点可作定量分析。常用于确定斑点的位置。缺点专属性不强.。 常用的显色剂 10％硫酸乙醇溶液：最常用的显色剂 配制方法：取10ml硫酸,用乙醇稀释至100ml 特点：与加热温度有关；腐蚀性强；其他成分也可显色 薄层色谱 1. 薄层板的制备：吸附剂的选择 2. 供试液制备（掌握）:溶解性/对照物溶液的制备 3. 展开剂的选择 ：与被测物结构的极性大小、溶 解度以及吸附剂的活度密切相关 4. 点样 5. 展开 6. 晾干、显色 7. 斑点的检视、薄层鉴别的判断、或定量 8. 薄层板的记录 四、 皂苷类的定量分析 总皂苷测定：醇提 水饱和正丁醇萃取或大孔树脂吸附洗脱 测定-常用重量法、比色法 皂苷元测定：总皂苷酸解 苷元 测定——比色法、薄层色谱法、高效液相色谱法 单体皂苷测定：薄层色谱法、高效液相色谱法 但在中药制剂中如无特殊原因，应尽量避免将药品水解后测定水解产物，因为如此测定已不能客观反应药品自身的质量，更无法进行稳定性考察 总皂苷测定 重量法：根据皂苷类成分的溶解性进行提取、分离及纯化后得到总皂苷，恒重、称量，并计算样品中总皂苷含量。 一般少用，主要用于含皂苷的原料药质量控制。 如甘草浸膏中甘草酸含量测定 比色法 一般指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下的重量 总皂苷测定 比色法：利用皂苷能与某些试剂反应后产生颜色，然后于可见光区进行比色测定。 显色后能在紫外光区产生吸收，用UV测定 专属性差，但反应灵敏、方法简便、易行 常用的显色试剂 测定总皂苷、总皂苷元的含量时，可用单体皂苷或皂苷元作对照 常用的皂苷显色剂 ①浓硫酸 测定甾体皂苷的通用试剂。 甾体皂苷常显黄色(80～90℃反应30～60min）。 ②高氯酸 测定具△5的苷元,因△5不饱和结构与高氯酸在室 温下即可生成黄色。如：薯蓣皂苷元，10’、410nm、30’ 内稳定,25～200ug符合比尔定律. ③浓硫酸－醋酐、硫酸－醋酐－冰醋酸、硫酸－冰醋酸试剂： 主用于检测甾体皂苷。如：人参总皂苷,60℃、25min, 520nm测定. 甘草次酸在529nm测定. ④芳香醛-硫酸或芳香醛-高氯酸 主用干检测三萜皂苷，甾体 皂苷也可用。需注意控制反应条件. ⑤其他试剂：如亚甲蓝与甘草酸结合物，640nm比色。 2,6-二丁基对甲酚与甘草酸呈色,575nm比色。 复方丹参片中三七皂苷的含量测定——大孔树脂分离－比色法 复方丹参片05版药典：HPLC法测定丹参酮IIA，丹参酚酸B 大孔树脂： 大孔树脂规格的选择： 1.大孔树脂性质与吸附物质的性质遵循相似性相吸的原则。极性较大的化合物一般适合在中等极性以上性质的大孔树脂上分离，极性小的化合物适合在非极性的大孔树脂上分离。 比如用大孔树脂分离银杏黄酮 S-8极性： 吸附量 126.7mg/g AD-8弱极性： 吸附量102.8mg/g H-107非极性： 吸附量 47.7mg/g 银杏黄酮具有多酚结构和糖苷链，具有一定吸附和亲水性，有利于弱极性和极性大孔树脂吸附 大孔树脂规格的选择： 2.被吸附物质分子的大小和树脂孔径的关系。大孔树脂的吸附量大小受树脂极性和骨架结构影响外，还受到树脂空间结构的影响。树脂吸附过程中，树脂内部孔径是被吸附物质扩散的路径，在比表面积一定的情况下，适当增加树脂孔径，亦会增大被吸附物质的扩散速度，有利于达到吸附和解析平衡 比如不同规格的大孔树脂对大豆皂苷的分离 聚苯乙烯