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结核分枝杆菌实验室检测方法的临床研究 　　摘要：结核分枝杆菌是导致结核病发生的主要致病菌，传染性强，具有较高的发病率和病死率。通常临床诊断结核病时，对诊断方法要求高，需准确、快速、特异性诊断，同时可以准确判断结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。目前结核分支杆菌实验室检测方法日益增多，而其检测结果的敏感性和特异性并没有显著提高。本文就对结核分枝杆菌实验室检测方法进行综述研究，以此寻求简单方便、准确性高、应用广泛的实验室检测方法。 　　关键词：结核分枝杆菌；实验室检测方法；结核病 　　结核病是目前世界严重性慢性传染病，在早期WHO就以对结核病发出紧急预告。结核分枝杆菌也可称为结核杆菌，在1882年Koch证明其是结核病病原体[1]。现今诊断技术、治疗方法的改进与发展，相应降低了结核病的死亡率。但随着而来的是结核分枝杆菌耐药菌株的出现，使结核分枝杆菌耐药率不断上升，死亡率不减反增[2]。在治疗和控制结核病时，主要是根据实验室检测方法早期准确对结核分枝杆菌的诊断。现综述如下文。 　　1细菌学诊断技术 　　1.1直接厚涂片法 直接厚涂片法操作简单、方便快速，成本低廉，是临床诊断结核病细菌学常用方法。相关资料显示采取直接厚涂片法，其检出率与普通涂片法相比，其高出率高达19%[3]，是《结核病诊断细菌学检验规范》中对结核病诊断的规定方法。 　　1.2集菌涂片法 集菌涂片法利用检测标本体积或离心、浮游等方法，使标本中结核杆菌富集，操作复杂，应用少。 　　涂片法的应用，成本低廉，操作简单，但敏感性约为37%，较低，特异性为94%[4]，无法有效准确区分结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌。 　　1.3 BACTEC-TB-460快速检测系统 BACTEC-TB-460快速检测系统可对结核分枝杆菌代谢产物进行有效测定，于米氏7H12培养基中添加放射性14C量，阳性则为生长指数GI值超过19[5]。此种方法初代分离率较高，报告时间短，2d内可检出阳性标本，而改良罗氏法最快需要约20d才可检测出阳性结果，阴性检测需2个月报告，而BACTEC-TB-460快速检测系统只需1个月[6]。该法可分离分枝杆菌，在分枝杆菌药敏试验和菌型鉴定中得到广泛应用。但该法污染率高，微量放射线，会污染环境，且操作技术水平要求高，价格高。 　　1.4变色液体培养基培养法 结核分枝杆菌在实施培养基中发现，含有多种维生素、抗生素、谷氨酸钠、变色剂、马血清等营养丰富的选择性培养基。其培养基营养丰富，其检测率高。相关学者[7]报道，痰标本阳性检测时间约7d，发生率52%，污染率2.8%。在改良罗氏法检测中检出时间约20d，阳性率38%，污染率2.1%。 　　1.5 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养仪 BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养仪在检测结核分枝杆菌时，通过在MGTI培养管中置入检测标本，管中营养成分和氧气会被生长的分枝杆菌吸收，通过MGTI培养管中的氧气浓度变化会相应改变荧光显示剂。当氧气消耗时会促使管内荧光指示剂释放荧光。培养仪报警，阳性指示器红色，且液晶显示屏会显示检测结果阳性位置，此种方法可有效判断分枝杆菌，并进行细菌的药敏试验。 　　1.6噬菌体生物扩增法 噬菌体生物扩增法是在1997年所发现的快速检测结核分枝杆菌的新型技术[8]。噬菌体生物扩增法的应用，在噬菌体能感染、裂解结核分枝杆菌等基础上，对检测标本中MTB利用特异性MTB噬菌体快速使其感染和裂解；未感染MTB的噬菌体经杀病毒剂有效清除，继续大量复制，以此裂解MTB，释放子代噬菌体。子代噬菌体感染可生成敏感细胞，在琼脂平板上肉眼可见敏感细胞菌苔的噬菌斑[9]。噬菌斑数量越多，结核分枝杆菌的数量也越多。 　　2免疫学诊断技术 　　2.1结核抗体检测 酶联免疫吸附试验（ELISA）是至今诊断结核诊断常用方法，通过ELISA法可有效检测患者血清中结核特异性抗体。斑点免疫层析试验操作简单、方便快速优于ELISA，可单人份测定。免疫印迹试验特异性和敏感性较高，结合凝胶电泳与酶联免疫技术[10]，可有效检测血清结核抗体对活动性结核病，但操作较复杂，临床应用少。 　　2.2结核抗原检测 结核抗原是机体感染结核杆菌后常见物质，通过检测结核抗原，可直接判断结核杆菌的存在，降低患者因免疫应答较低致假阴性的出现，该法通过对结核病患者血清结核抗原进行检测，以此判断。在相关学者[11]报道中，采取结核抗原检测方法检测，其检测敏感性高达84.17，特异性高达92.19%，可见，结核抗原检测方法存在较高的敏感性及较强的特异性。 　　2.3细胞因子检测 结核病患者在MT抗原激活下，血液或局部中T淋巴细胞、巨噬细胞或单核细胞会释放白细胞介素2受体、R干扰素、膜IL-2受体及A肿瘤坏死因子[1