【2017年整理】TCID50概念 方法.doc

山东畜牧兽医职业学院? 动物微生物及免疫教案 授课内容 血清学实验（二） 教学方式 PowerPoint讲授 授课班级 ? 授课时数 2 教学目标 说出沉淀试验的概念、类型和应用，补体结合试验的实验系统和结果。 教学过程 复习提问并导入新课（约3min）回顾血清学试验的类型 教学内容（约82min） §11-3? 沉淀试验 一、★原理：可溶性抗原＋抗体　→→　Ag-Ab →→ 沉淀现象 二、类型 1．环状沉淀试验：炭疽病的诊断、细菌的定型、血迹鉴定等 2．絮状沉淀试验 3．★琼脂扩散试验：抗原与抗体在含有电解质的琼脂凝胶中扩散，当两者比例适当处相遇，发生沉淀反应，出现肉眼可见的沉淀带。 （1）单向单扩散?? （2）单相双扩散??? （3）双向单扩散 （4）双相双扩散? ?教学方法：比方、举例 ??? §11-4?? 补体结合试验? ?????简介补体结合试验的原理、结果和应用。 ??? §11-5中和试验 ?????简介中和试验的原理、结果和应用。 ????§11-6 免疫标记技术 ?????简介免疫标记技术的原理? 特别介绍ELISA和荧光抗体技术 小结（5min） 复习思考题 1．什么是沉淀试验？ 2．琼脂扩散试验的原理和应用？ ? 标记★的内容为重点，标记◎的内容为难点。 第三节? 沉淀试验 一、沉淀试验的概念 ????沉淀试验：可溶性抗原(如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等)与相应的抗体结合，在适量电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的白色沉淀，称为沉淀试验（Precipitation reaction test）。 ????参与沉淀试验的抗原称沉淀原，抗体称沉淀素。 二、沉淀试验的类型 （一）环状沉淀试验（ring precipitation test）? ????????用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的Ascoli试验、链球菌的血清型鉴定、血迹鉴定。 （二）琼脂凝胶扩散试验? 简称琼扩， ???? 1.概念：1%琼脂凝胶的孔径约为85nm，因为凝胶网孔中充满水分，小于孔径的抗原或抗体分子可在琼脂凝胶中自由扩散，由近及远形成浓度梯度，当二者在比例适当处相遇时，即可发生沉淀反应，因形成的抗原抗体复合物为大于凝胶孔径的颗粒，不能在凝胶中再扩散，就在凝胶中形成肉眼可见的沉淀带，称此试验为琼脂凝胶扩散试验。 ????2.琼脂扩散分四类(图11-3)：单向单扩散? 单向双扩散? 双向单扩散? 双向双扩散。 ????（1）双向单扩散? 又称辐射扩散?? ??????????????????????应用：传染病的诊断，如鸡马立克氏病的诊断。 ???（2）双向双扩散? 应用最广泛 ??? ???????? 应用：细菌、病毒的鉴定和传染病的诊断。如检测口蹄疫、马立克氏病、禽流感、传染性法氏囊病的琼脂扩散方法。双扩散用于检测抗体(图11-4)?????????????? ??????????琼脂扩散四种基本类型（据陆承平）???????????????????? 双扩散用于检测抗体（据陆承平）? ????（三）免疫电泳? 免疫电泳技术是把凝胶扩散试验与电泳技术相结合的免疫检测技术。 ????????优点：在琼脂扩散的基础上，提高了反应速度、反应灵敏度和分辨率。 ????????在临床上应用比较广泛的有对流免疫电泳和火箭免疫电泳等。 ???????????????????????????????????????????????????????????? ?? ???????????????????? ? ?????????????????????????????????????????? ??????????????????????????? ?? ????1.对流免疫电泳(图11-5)? 是将双向双扩散与电泳技术相结合的免疫检测技术。 ????用于多种传染病的快速诊断。如口蹄疫、猪传染性水疱病等病毒病的诊断。 ????2.火箭免疫电泳(图11-6)? 是将辐射扩散与电泳技术相结合的一项检测技术，简称火箭电泳。将pH8.2～8.6的巴比妥缓冲液琼脂融化后，冷至56℃左右，加入一定量的已知抗血清，浇成含有抗体的琼脂凝胶板。在板的负极端打一列孔，孔径3mm，孔距8mm，滴加待检抗原和已知抗原，电泳2～10h。电泳时，抗原在含抗血清的凝胶板中向正极迁移，其前锋与抗体接触，形成火箭状沉淀弧，随抗原继续向前移动，此火箭状锋亦不断向前推移，原来的沉淀弧由于抗原过量而重新溶解。最后抗原抗体达到平衡时，即形成稳定的火箭状沉淀弧（图11-6）。在试验中由于抗体浓度保持不变，因而火箭沉淀弧的高度与抗原浓度呈正比，本法多用于检测抗原的量（用已知浓度抗原作对比）