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锦鲤疱疹病毒的鉴定及预防思考 　　摘 要：锦鲤是一种较为名贵的大型观赏鱼，来源于中国，兴旺于日本。在近些年来，我国江苏十分昌盛，开始进行大规模的养殖，逐渐成为渔业发展重要经济增长点。对渔业的生产内涵、产业链完善有重要作用。本文分析锦鲤疱疹病毒鉴定和预防思考。 　　关键词：锦鲤；疱疹病毒；鉴定思考 　　中图分类号：S943 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20150733147 　　前 言 　　锦鲤疱疹病毒主要由病毒感染引起，是一种普通的框镜鲤由病毒感染之后，具有高度传染性，一旦感染就会致死。该病主要出现在春秋季节，水温为18～28℃之间，这水温是病毒流行最佳水温。随着时间的推移，病毒在低温环境下蔓延的趋势加强。KHV感染范围比较狭小，只会感染鲤鱼、锦鲤以及一些普通的鱼种。同锦鲤鱼种类似，都喜欢在合适的水温下生长，也不会感染上疾病。一些成鱼和幼鱼就会容易感染。成鱼相对幼鱼而言，死亡率较高。从2003年以来，我国东北地区的普通锦鲤感染病毒的概率越来越高，死亡率高达90%。进行PCR检测发现KHV呈阳性。KHVD病毒在我国锦鲤和匡锐鲫蔓延较为严重，导致我国经济损失。 　　1 病毒效价测定及动物感染试验 　　1.1 毒价测定 　　把病毒液进行稀释，稀释量为10倍之上，将其分别接种入96孔板下进行培养，获得锦鲤单层细胞，每个稀释度再进行8孔重复。放置在22℃下进行培养，安置上阳性对照孔，对没有稀释的细胞毒以及阴性对照孔分析，记录下CPE，再使用Karber法计算出TCID50效价。 　　1.2 动物感染试 　　使用的是体积较轻的健康锦鲤作为实验对象，数量为30条，在实验室里观察了28d，没有发现任何病症。将病毒培养液注射到实验鱼体内，数量为20条，每一条注射量为1mL，水温维持在20～24℃之间。另外，一组数量为10条的；锦鲤作为对照鱼，考试观察实验现象。临床表现出，在有症状的鱼组中提取出了DNA病毒，进行PCR鉴定。同时，病毒锦鲤的组织进行切片检查。 　　1.3 PGR鉴定分析 　　1.3.1 对病毒基因开展鉴定工作 　　把ORF25基因进行PCR拓增实验，得出的产物胶电泳检测结果，发现特异片大量的衍生而出。将其连接到pMD]8-T载体中，进行科学的鉴定。 　　1.3.2 序列测定和分析 　　将测序结果同KHV序列结果对比，结果显示出，在OQF25基因中，有病毒的侵蚀，病毒类型为KHV-1，同源病毒符合度高达99.9%，锦鲤类型定位为KHVcj。氨基酸序列分析显示：当KHVcj氨基酸位置发生变动后，则有一个稳定的突变位点存在。实验显示，当期在第239位时，突变从E变化为K。氨基酸抗原性分析得出，该距离的抗原性水平高。 　　1.4 病毒毒价测定 　　开启病毒毒价测定，经过检测发现，KHVcj第2代细胞培养物TCID效价为10。当锦鲤感染上病毒之后，鱼活动减少，表现为反应迟钝，食欲不振，鱼表面皮肤泛白，有斑点。体表黏液分泌量增多，有些病鱼腹部底部有出现迹象。随着时间推移，白色斑点增多。随着感染时间增加到8d开始死亡。实验发现，当感染病毒在30d内，发病率达100%。而，对照鱼组没有任何变化。进行PCR鉴定发现，取出了临床症状实验鱼之后，锦鲤肾脏组织被病毒破坏，PCR扩展增大，而849bp特异性目的片段增多。在病毒感染到3d之后，实验鱼的鳃薄片急速减少，炎症扩散，扩散到整个鱼体周边，整条鱼的血管充满血。 　　2 锦鲤疱疹病毒思考 　　研究建立适宜于锦鲤养殖场新进厂区苗种、亲鱼、苗种和养殖场养殖环境中疱疹病毒的分子检测技术体系，提高了养殖场苗种病毒检疫能力。为了有效预防病毒发生，需做好预防工作。 　　2.1 在生态防控技术层面 　　加深对生态防控理念的认识，在养殖进程中，借助微生态剂，全面开展养殖水体体制监控。养殖区采用生态防控措施。这里的生态指的是，池塘水体表面同大气接触的横截面，这个横截面是池塘鱼类交换气体重要场所，是进行呼吸通道。同时，这个界面也是水产动物的肠道，这是个形象的比喻，池塘内的锦鲤的呼吸和吸收，都是经过该界面实现，是能量转接平台。另外，也是气-水界面关注藻相。从鱼类病毒感染情况上看，这些病毒可以分类为应激性病毒、营养性病毒等等。在生态防控体系中，每一道体系落实到位之后，才能有效地防止鱼类受到病毒侵害。一般而言，生态防控中的“控”，是针对水生动物健康而言的，是控制水生病毒有效防道。 　　2.2 引入中草药消毒 　　众所周知，中草药具有天然、高效以及无毒副作用功效，不仅能够起到抵抗病毒功效，还能调节动作机体免疫能力。提高动作免疫功能，激发鱼类的抗应激作用。项目组基于分析发现，引入大黄蒽醌及其大黄素中药材提取物，能对水体中的污染物进行清理，提升感染效应。另