花卉組培苗生产技术.docVIP

花卉组培苗生产技术规程 2 术语和定义 2.1 花卉 2.2 植物组织培养 2.3 花卉组培苗 2.4 植物生长物质 2.5 外植体 2.6 培养材料 2.7 培养基 2.8 接种 2.9 增殖 2.10 继代 3 生产设备（施）及化学试剂 3.1 生产设备（施） 3.1.1 建筑设施 3.1.2 生产设备 洗涤设备 灭菌设备 接种设备及工具 培养设备 实验设备 细胞学观察设备 3.2 常用化学试剂 3.2.1 洗涤剂 3.2.2 灭菌剂 3.2.3 无机盐类和有机物类 3.2.4 植物生长物质 细胞生长素：吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、吲哚乙酸（IAA）、2,4～二氯苯氧乙酸(2,4～D)等。 赤霉素：GA3等。 乙烯：C2H4。 3.2.5 碳水化合物 3.2.6 固化剂 3.2.7 培养基附加成分 mg/L～500mg/L、水解酪蛋白（CH）200mg/L～500mg/L以及腺嘌呤(ADE)1mg/L～80mg/L等。 4 消毒灭菌操作规程 4.1 洗涤室的消毒灭菌 4.2 接种室的消毒灭菌 min～30min，并定期(一般7d)用高锰酸钾及甲醛混合薰蒸。 4.3 培养室的消毒灭菌 4.4 超净工作台的消毒灭菌 min～30min，并用70％酒精喷洒台面，或用新洁尔灭擦拭台面；定期清洗超净工作台过滤膜以保证过滤膜清洁。 4.5 培养基的消毒灭菌 min～20min即可。 4.6 接种器具的消毒灭菌 4.7 污染的瓶苗消毒灭菌 5 培养室环境调控 5.1 温度 5.2 湿度 5.3 光照 6 组培苗生产操作规程 6.1 培养基的配制 6.1.1 培养基选择 6.1.2 母液的配制和保存 母液的配制 mg/ml～1.0mg/ml，植物生长物质的配制方法见附录B。 母液的保存 6.1.3 培养基配制程序  6.2 培养材料及消毒 6.2.1 培养材料的选择和确定 6.2.2 外植体的消毒灭菌 ①茎尖、茎段及叶片等的消毒：70%酒精浸泡数秒钟，无菌水冲洗2次～3次，再用0.5%～2%的次氯酸钠浸泡10min～15min，用无菌水冲洗3次后接种； ②种子的消毒：70％酒精迅速漂洗一下，果实用2％的次氯酸钠浸泡10min，无菌水冲洗2次～3次后接种果实内的种子或组织；种子先用0.5％～2％的次氯酸钠浸泡20min～30min或用0.1％的升汞消毒0.5min～5min，用无菌水冲洗3次后接种。 ③根及地下部器官的消毒：0.1％～0.2％的升汞消毒5min～10min,或用2％的次氯酸钠浸泡10min～15min,然后用无菌水冲洗3次～5次后接种。 6.3 初代培养 6.3.1 初代（诱导）培养基 MS + 6-BA0.2mg/L + IBA0.02mg/L为花卉组培苗常用初代培养基之一。可以根据培养的植物种类、接种部位具体调整。 6.3.2 外植体的接种 6.4 组培苗的增殖与继代培养 6.5 组培苗生根 6.5.1　瓶内生根 　生根材料的选择 在 诱导生根 6.5.2　瓶外生根 　瓶内诱导瓶外生根 瓶外生根（微扦插） NAA、IBA或ABT生根粉（一般100ppm～800ppm）速蘸或浸泡，扦插到消毒后的无土基质中，基质多采用蛭石、草炭、珍珠岩或混合基质等。注意温度、湿度等环境条件，初期相对湿度要求高于90％，以后逐渐降低相对湿度在60％～80％之间。 6.6 组培苗炼苗移栽 6.6.1 组培苗炼苗 6.6.2 组培苗移栽 min后移栽到基质中。基质采用蛭石、草炭、珍珠岩或混合基质等。控制温度25℃±2℃，相对湿度前期80％～90％，以后逐渐降低湿度。当试管苗根系发达、形成侧须根以后，可以移栽到营养钵中，成为容器苗。 6.7 移栽苗管理 6.7.1 肥、水管理 6.7.2 病虫害防治 b) 加强通风，每隔7d喷一次广普性杀菌剂。 c) 一旦发现虫害、病害及时药物治疗。 附录A （资料性附录） 常用培养基成分表（单位：mg/L） Murashige 和 Skoog (MS) (1962) Gamborg (B5) (1968) (N6) (1975) Linsmaier 和Skoog （LS） (1965) Chee 和 Pool (C2D) (1980) (ASH) (1986) 曹孜义等 (GS) (1986) (NH4)2SO4 NH4NO3 KNO3 CaCl2·2H2O MgSO4·7H2O KH2PO4 NaH2PO4·H2O Na2HPO4 Ca(NO3)2·4H2O 1650 1900 440 370