（新）4细胞工程学习指导.docVIP

细胞工程学习指导 绪 论 1. 细胞工程学的概念 它是应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。?? 2.植物组织培养的含义??（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。　　　（狭义）组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。.植物组织培养意义：1902年德国植物生理学家Haberlandt提出了“细胞的全能性”原理。1962年Marshing和Shong发明了MS培养基.????　　　　　　　　加速无性繁殖;获取脱毒苗;扩大变异范围：克服远缘杂交后代不育性和杂交不亲和性。通过原生质体融合获得体细胞杂种和胞质杂种。倍性育种：通过胚乳培养获得三倍体；通过花粉和花药培养进行单倍体育种。结合诱变育种在试管内进行优良变异的诱导.选择和繁殖。加速亲本材料的纯化。一般选育自交系需4－6代花粉培养获得单倍体植株，染色体加倍后即为纯合二倍体。种质资源的试管保存。为基因工程的全面实施人工控制遗传方向打下基础。 准备室 进行药品的保存、配置、消毒、分装等。器具的洗涤、干燥、消毒。　生理生化指标的测定等。 接种室 进行材料的接种。外设缓冲间—放置拖鞋.工作服.工作帽等。 培养室 植物材料的无菌培养。外设缓冲间—放置拖鞋.工作服等。 细胞学实验室 进行培养材料的组织学.细胞学.观察照相等。 生化分析室 在以培养细胞产物为主要目的的实验室中，应建立相应的分析化基本设备配置验实验室，以便于对培养物的有效成分随时进行取样检查。 2.灭菌方法有哪些，各有何利弊1.高压蒸气灭菌；2.燃烧灭菌；3.干热灭菌：易引起火灾；4.射线 灭菌：适于不耐高温材料。 . 玻璃器皿：湿热灭菌或干热灭菌. 金属器皿：干热灭菌. 接种室：接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾 3.培养基基本类型 MS---无机盐浓度高，微量元素种类齐全，养分均衡。应用最广，特别是培养再生植物。 B5---含较高硝酸盐、较低的铵盐，较高的VB1，用于细胞悬浮和原生质、葡萄、豆科植物的培养。 N6---较高硝酸盐、较低的铵盐，禾本科花药培养和柑橘类植物的花药培养。. Nitch---无机盐浓度高， White----低盐培养基，用于生根培养。 4.培养基基本成分 水------水既是培养基营养成分的溶剂，又是培养基的重要组成部分，它占培养基成分的95％。 原生质体培养、细胞培养以及分生组织培养一般应使用双蒸水或超纯水.如果是大批量的快速繁殖培养，则可使用一般蒸馏水或纯净水以降低生产成本，提高生产效益。 无 机 盐类大量元素-----培养基的使用量一般在每升几十至几千毫克。包括C、H、O、N、P, K、Ca、Mg、 S 微量元素 ------微量元素的用量一般低于10-5～10-7克分子浓度。有Fe、Cu、Zn、B、 Mo、Mn、Co 糖----是碳源和能源，多利用蔗糖， 维生素---B1是必需的，B6、烟酸等，原生质培养含有大多数基本维生素。 氨基酸---细胞原生质培养特别需要，水解酪蛋白， 激素----细胞分裂素--BA（6－苄基酰嘌呤）KT（激动素，糠基酰嘌呤）ZT（玉米素）2iP（异戊烯酰嘌呤--2.4-D，IAA，NAA，赤霉素：GA3乙烯及乙烯抑制-----固体培养 活性炭 -----防止外植体变褐 附加复合成分----椰子汁、酵母提取液 5. 培养基的固化剂有哪些，作用是什么?　　琼脂、Gelrite、塑料泡膜、玻璃丝、岩棉、玻璃珠、Gala胶。　　作用：束缚水分、吸收化合物.常有哪些物质需过滤消毒IAA、ZT、GA3及某些维生素、抗生素、酶、植物提取物、秋水仙素等。 固体培养---培养基中加入0.6--1.0%琼脂、卡拉胶等， 液体培养---无凝固剂，分静止、震荡悬浮培养两种 悬浮培养---成批、半成批、连续培养 单细胞培养----微室、平板、看护培养 8.外植体概念及其选择 外植体（explant）是指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料 外植体的来源----用于外植体分离的母体植物材料一般有三种来源： 一是生长在自然环境下的植物； 二是有目的培育、在