【2017年整理】表面活性剂在蛋白给药中的应用.docVIP

表面活性剂在蛋白药物中的应用 引言 表面活性剂是由两种截然不同的粒子形成的分子，一种粒子具有极强的亲油性，另一种则具有极强的亲水性。 溶解于水中以后，表面活性剂能降低水的表面张力，并提高有机化合物的可溶性。传统观念上认为，表面活性剂是一类即使在很低浓度时也能显著降低表（界）面张力的物质。随着对表面活性剂研究的深入，目前一般认为只要在较低浓度下能显著改变表（界）面性质。表面活性剂或与此相关、由此派生的性质的物质，都可以划归表面活性剂范畴。随着生物技术的高速发展，多肽、蛋白质类药物不断涌现。目前已有35种重要治疗药物上市，生物技术与生物制药企业的发展也日益全球化。生物技术药物研究的重点是应用DNA重组技术开发可应用于临床的多肽、蛋白、酶、激素、疫苗、细胞生长因子及单克隆抗体等。据Parexl＇s Pharmaceutical RD Statistical Source Book报道，目前已有723种生物技术药物正在接受FDA审评(包括Ⅰ～Ⅲ期临床及FDA评估)，700种药物处于早期研究阶段(研究与临床前)，还有200种以上药物已进入最后批准阶段(Ⅲ期临床与FDA评估)。但是由于蛋白本身的不稳定性和难口服吸收的性质，研究表面活性剂在蛋白药物中的作用有着重要的意义和实际效益。本文主要关注于生产中的应用和微凝胶的研究。 二、药物生产中应用的表面活性剂 表面活性剂是两性的，易于吸附聚集在界面。表面活性剂可以依据极性端分类为阳离子型，阴离子型非离子型和两性型。一个很好的阴离子型表面活性剂是十二烷基磺酸钠（SDS）。表面活性剂有很广泛的应用，在制药和生物工业在很多情况中应用非离子表面活性剂，包括稳定蛋白治疗活性。下面介绍两种生产过程中常用的表面活性剂。 2.1 聚山梨醇酯 聚山梨醇酯有一个通用结构，包含一个山梨聚糖环，并且在羟基处有聚合的环氧乙烷，只有在脂肪酸链有区别。（见图1） 图1. 聚山梨醇酯表面活性剂的化学结构。 脂肪酸链的长度和不饱和度的区别导致聚山梨醇酯与蛋白的结合能力有了区别。[1]最常使用的非离子型表面活性剂是聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯 80，商品名为Tween 20?和Tween 80?。聚山梨醇酯80比聚山梨醇酯20有更好的表面活性，更低的临界胶束浓度，因为它有更长的单不饱和脂肪烃长链。[2]聚山梨醇酯80也因为长脂肪酸链表现出比聚山梨醇酯20和人类血清白蛋白低相互作用的性质。[1,3]聚山梨醇酯80和20与促红细胞生成素的亲和力和相互作用也有了报道。促红细胞生成素与聚山梨醇酯80结合时的三维结构有最小的性能，和聚山梨醇酯20结合时，蛋白有部分展开。[4] 聚山梨醇酯在蛋白药物生产过程中，如搅拌、晃动、冷冻干燥和冻融时，可以抑制蛋白聚合，并且在很大程度上阻止蛋白吸附在固体表面上[3,5-9]。然而效力取决于实际情况。一个研究中报道，抗体悬浮液在聚山梨醇酯20浓度高于0.0025%(w/v)时摇晃，聚合会被抑制。但是表面活性剂浓度低的时候，蛋白就不再稳定。搅拌的时候也需要更多表面活性剂来稳定蛋白。[10] 聚山梨醇酯在中等温度下容易自身氧化，基本是PEO和烯烃不饱和位点的自由基反应。并且在高温时，水解也是很明显的机制。[11]还有的研究是，聚山梨醇酯 80?可以在摇晃时抑制IL-2突变体的聚合，而在储存时，温度依赖的加速聚合。聚山梨醇酯的降解氧化物的过氧化物，会加速蛋白氧化速率，从而降低了蛋白药物的稳定性。[12] 2.2 泊洛沙姆 泊洛沙姆是聚氧乙烯、聚氧丙烯和聚氧乙烯的三嵌段共聚合物（PEO-PPO-PEO），商品名为Pluronics? 或者 SynperonicsTM，也是药物工业中常用的一中表面活性剂。泊洛沙姆在美国和英国药典中列入赋形剂。[13](实例见图2) 图2、poloxamer188的化学结构 泊洛沙姆表现出强温度、浓度依赖性的复杂的聚合活性，包括单聚体、低聚体、各种几何结构的微粒和更大的簇。各种不同分子量和PPO/PEO比值的三嵌段共聚合物的临界胶束温度和浓度值用不同的方法预测。[14-18]总的来说，有着大的疏水基团（PPO）的复合物可以在低浓度下形成胶束，或者在同样地体积摩尔浓度下，有着低的临界胶束温度。给一个固定的PPO:PEO比值，有着更大分子量的泊洛沙姆可以在更低的浓度和温度下形成胶束。亲水性PEO基团的大小在形成胶束的时候扮演了不是那么重要的角色。 Alexandridis等人[16]对许多三嵌段共聚合物胶束的形成进行了热力学分析，得到胶束化的标准自由能、焓和熵。他们发现所有检测的三嵌段共聚合物胶束化的焓都是正值，表明单聚体从溶解态变成胶束是吸热过程。胶束化的驱动力是负熵。 泊洛沙姆188（BASF Pluronic? F68，图3）广泛用于哺乳动物细胞培养产品。生物反应器正越来越