【2017年整理】免疫学实验指导书.docVIP

免疫学实验指导 刘佳斌编 生命科学学院 生物技术系 2005.3 实验1 动物的注射采血及血清制备 家兔采血有耳静脉采血，耳动脉放血，心脏采血和劲动脉放血法，耳缘静脉采血一般适用于只需少量血液，常用于免疫注射采少量血，测其效价，心脏采血和耳动脉采血法，耳缘静脉采血一般只适用少量采血。常用于免疫注射采少量血，测其效价。心脏采血和耳缘动脉采血可采大量血有能保存动物，从动脉可采大量，动物死去。兔一般采血20ML不影响其存活。 鸡一般用心脏采血法，每只鸡一次取血20ML，不影响其存活，经3—6个月后，可再次采血。注射途径一般有皮下、静脉、皮内和腹腔。 一、目的与内容： (一)目的 1.学习动物不同部位的采血方法 2.练习对家兔耳静脉的注射方法 3.用离心法制备血清 (二)内容 1、鸡心脏采血 2、家兔采血 3、制备血清 二、材料与用品 (一)材料 兔、鸡 (二)用品 生理盐水、注射器、剪刀、镊子、试管、离心管、离心机 三、操作与观察 (一)鸡心脏采血 1、固定鸡腿、翅膀，拔取心脏部位羽毛，用手将鸡按定。 2、寻找内肋骨到肩胛部皮下静脉，心脏在此静脉分支下面，以食指触摸心跳，消毒，垂直刺入针头，如触及肋骨则稍后退，将针头稍后偏于胸骨，切不可硬往里插，针头向里刺入后，可感到心脏跳动。此时，针头刺入心脏，徐徐抽取血液。采血20ML取下针头，将血液放入离心管。 (二)家兔采血 1、家兔心脏采血 （1）固定兔，剪取左前胸心脏部位的毛，酒精棉球消毒皮肤。 （2）用左手食指、中指、无名指防在右胸处，轻轻向左推，将心脏推至左恻固定，拇指在胸左恻由下向上数至第三至四肋骨探测心脏搏动最剧烈处 （3）将针头从搏动处刺入心脏，若准确徐徐抽取血液，足量后拔除，再改变方向成径直刺入心脏，取血液20ML，放入离心管。 （4）家兔静脉注射，在耳缘静脉注入1ML生理盐水。 2、家兔耳缘静脉采血。 (三)制备血清 四、作业与思考 1、心脏采血关键什么？需要注意哪些问题？ 2、抓兔子时为什么不能抓它的双耳？正确的抓取方法是什么？ 实验2 抗原与免疫血清的制备 将抗原注射入动物体内，刺激动物的B淋巴细胞转化为浆细胞，产生特异性抗体。待其血清中累积大量抗体时，采其血液分离血清，即抗体的免疫血清。抗原量低到一定程度时，抗体不能产生或用现有方法不能测出，但超过最高限度，又对抗体产生抑制作用。本实验抗原为细菌细胞，采用每毫升含9亿个细菌比较恰当。 一、目的与内容 (一)目的 1、抗原与抗体的制备方法 2、为凝集实验制备材料 (二)内容 1、抗原的制备 2、免疫血清的制备 二、材料与用品 (一)材料 大肠杆菌，家兔 (二)用品 麦氏比浊管，试管，注射器，9号、7号针头，离心机等 0.5%的石炭酸生理盐水 三、操作与观察 （一）抗原的制备 取5ML0.5%的石炭酸生理盐水，注射大肠杆菌斜面，洗下菌台 用无菌毛细菌滴管吸取洗下的菌液，注入无菌小试管 将此含有菌液的小试管放60度水浴箱中1小时，并不时摇动。 取一与比浊管同质量的小试管，加菌液1ml，再加石炭酸生理盐水４ml（或更多，是原菌液浓度而定），混匀后各比浊管比浊。 麦氏比浊法原理：某一未知菌浓度，菌液在投射光作用下用肉眼与某一比浊管比较，如果二者透光度相同，即可目测该菌大致浓度。 （5）稀释：用0.5％的生理盐水，待菌液稀释9亿／ｍｌ，即等浊于第3支。 （二）免疫血清的制备 （1）注射动物：耳缘静脉注射抗原。 （2）14日采血1ｍｌ，分离血清，测其效价，合格即大量采血。 （3）心脏采血 （4）分离免疫血清。 　　　 １日 ０．２ｍｌ ４日 ０．６ｍｌ ２日 ０．４ｍｌ ６日 ２．０ｍｌ 四、作业与思考 １．在动物体内制备免疫血清为何要多次注射？ ２．制备大肠杆菌抗原时，使用石炭酸生理盐水和加热６０℃1ｈ的目的是什么？　 实验3 环状沉淀反应 可溶性抗原与相应抗体反应，在有电解质的情况下，会产生细微的沉淀，称为沉淀反应。环状沉淀反应是使抗原抗体在沉淀管内形成交界面，然后在此交界面处出现—环状乳白色沉淀物，出现此环状反应的抗原最高峰，稀释度为沉淀素效价。 一、目的与内容 (一)目的 通过沉淀素的效价测定，学习环状沉淀反应的操作方法及结果观察。 (二)内容 鸡血清与免抗鸡免疫血清发生沉淀反应。 二、材料与用品 (一)材料 鸡血清、兔血清、免抗鸡免疫血清 (二)用品 小试管、1ml吸管量筒、生理盐水 三、操作与观察 1.将鸡血清以1：25稀释，去该液1ml，用倍比稀释法稀释为各种浓度（1#1*、2# 2*……）分别表示自第1管、第2管中吸取1ml以此类推。） 试管号