遺传实验指导.doc

遗传学实验指导 一、实验项目 1、减数分裂的观察 2、果蝇唾液腺染色体的观察 3、花粉母细胞涂抹制片 4、分离规律 5、等位基因分离的验证 6、独立分配规律 7、基因的连锁与交换 8、有丝分裂 9、石蜡切片技术 10、染色体数目变异的诱发及鉴定 11、显微摄影技术 12、植物染色体组型分析 13、细胞核内DNA的鉴定 14、高等植物核DNA的简易快速提取 15、外源DNA的花粉管道导入技术 16、大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞的制备和转化 二、实验项目 实验一 减数分裂的观察 实验目的 观察并熟悉减数分裂的全过程，以及各个时期染色体的行为和变化，为学习遗传学基本规律奠定基础。 二、实验说明 减数分裂是在性母细胞成熟时，配子形成过程中所发生的一种特殊的有丝分裂。在性母细胞形成过程中，先由有性组织（如花药、胚珠）中的某些细胞分化为孢母细胞（2n），以后进一步由这些孢母细胞进行两次连续的分裂，而染色体只分裂一次，结果产生四个染色体数目减半的大（小）孢子（n）。这些孢子进一步发育为雌（雄）配子，通过雌雄配子的受精结合，新个体的染色体又恢复到与亲本相同的数目，从而保证了亲代和子代间染色体数目的恒定性。 减数分裂各时期的主要特点如下： 第一次分裂 前期Ⅰ 这一时期较长，变化也较复杂，一般又分为五个时期。 1、细线期：这是减数分裂开始时期，染色体细长如线，首尾不分，绕作一团，核仁明显，电子显微镜下观察，数目成双。 2、偶线期：由于螺旋化，染色体开始变短、变粗，同源染色体配对，出现联会，呈二价体状态是这一时期的主要特征。 3、粗线期：配对后的染色体逐渐缩短变粗，由于各染色体是由已复制的两条染色单体通过着丝粒连接起来，故每一配对的染色体中就含有四条染色单体，又称四合体。 4、双线期：四合体继续缩短变粗，同源染色体虽因非姊妹染色单体相互排斥而分开，但由于非姊妹染色单体之间发生交换，而在同源染色体的一定区段出现交叉结。 5、终变期：染色体变得更短更粗，交叉结向端部移动（端化），核仁、核膜开始消失，染色体分散在整个核内，此时观察染色体最为清楚，便于计数。 中期Ⅰ 核仁、核膜消失，染色体排列在赤道板上，成对染色体的着丝粒转向两极，纺锤丝出现。 后期Ⅰ 同源染色体由纺锤丝牵引着丝粒，向两极移动，由于各染色体的着丝粒尚未分裂，每一极只分到每对同源染色体中的一个，故两个子细胞将只有半数的染色体，从而实现了染色体数目的减半（2n→n）。 末期Ⅰ 染色体移到两极后，松开变细，形成子核，细胞质分裂，在中央由纺锤丝形成细胞板，形成二分体。 第二次分裂 前期Ⅱ 染色体又开始明显缩短，二分染色体的两个染色单体相互散开，但仍和着丝粒连在一起，没有分开。 中期Ⅱ 每个二分染色体又整齐地排列在各个分裂细胞的赤道板上。 后期Ⅱ 每个二分染色体的着丝粒纵裂为二，姊妹染色单体分别移向两极。 末期Ⅱ 拉向两极的染色单体形成新的细胞核，同时细胞质又分为两部分。这样经过两次分裂，形成四个子细胞，又叫四分体或四分孢子，每个孢子内只含有最初细胞的半数染色体，以后就开始了配子体的发育。 三、实验材料用具 1、材料玉米（2n=20）、普通小麦（2n=42）、水稻（2n=24）、黑麦（2n=14）、蚕豆（2n=12）花粉母细胞减数分裂各时期的永久制片。 2、用具 显微镜、二甲苯、擦镜纸等。 四、实验方法 根据前述减数分裂各时期的特点，在显微镜下，先低倍后高倍寻找花粉母细胞分裂相，仔细观察，并分析确定时期，最后按显微镜下观察的实际情况绘图。 五、作业 绘出减数分裂各时期的图象。 实验二 果蝇唾液腺染色体的观察 一、实验目的 学习解剖果蝇三龄幼虫的唾液腺及唾液腺染色体的制片方法，观察果蝇唾液腺染色体。二、实验原理 果蝇的唾液腺位于幼虫前端的食道两侧和神经球附近（图2-1）。剖取果蝇唾液腺细胞进行制片观察，可见到一个由4对染色体的着丝粒结合形成的染色中心，以及向四周伸展的5条染色体臂（X、2L、2R、3L、3R），其中第4对染色体为粒状，与染色中心密切相联，总称为唾液腺染色体（图2-2）。 果蝇唾液腺染色体是一种典型的多线染色体。它是果蝇唾液腺细胞核内有丝分裂所致，即核内染色体中的染色线连续复制而染色体并不分裂，结果使每条染色体中的染色线可多达500～1000条，长度和体积分别比其它细胞的染色体长100～200倍、大1000～2000倍，因此也称巨型染色体。由于每条染色体的染色线在不同的区段螺旋化程度不一，因而出现一系列宽窄不同、染色深浅不一或明