[免疫学]实验2辩析.pptVIP

固定家兔，用碘酒、酒精棉球消毒心前区皮肤。 在胸骨左缘外侧1-2cm左右、3-4肋间，选择心跳最明显处进针。（注射部位正确时，血液会自动涌入针管） 体重2kg左右的家兔，每次抽血一般不超过4-5ml，收集血液于无菌试管中。 放在试管架上，凝固4-5h后，离心，收集血清。 实验步骤： 注意事项： 取血部位要准确，不要划破家兔心脏，尽量不令动物死亡； 见到回血再取血； 向试管中注射血液时要将针头取下。 小结 抗原抗体检测：特异性、可见性 凝集反应:颗粒性抗原 直接凝集反应 玻片凝集----定性 沉淀反应：可溶性抗原 定性：环状沉淀、双扩、对流免疫电泳 实验报告 1.细菌鉴定的原理、步骤、结果和分析， 2. ABO血型鉴定的原理、步骤、结果和分析 3.对流免疫电泳的原理、步骤、结果和分析， 下次试验内容： 补体参与的反应：（*免疫血清制备与应用之3） 　　　补体的溶血反应；补体结合实验 T细胞数量的测定:E花环形成实验 T细胞功能测定：淋巴细胞转化试验 T亚群的测定 　　　 实 验 二 一、凝集反应 二、沉淀反应 三、免疫血清的制备（2）：家兔心脏采血 目的要求 （一）掌握凝集反应、沉淀反应原理、方法及用途。 （二）熟悉实验的操作手法。 一 、凝集反应 定义：颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应的抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝集块，这种现象叫做凝集反应。 分类： 直接凝集反应 间接凝集反应 间接凝集抑制反应 直接凝集反应 细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解质存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。 玻片凝集： 细菌鉴定 ABO血型鉴定 1、细菌鉴定 原理： 将已知抗体直接与未知的颗粒性抗原物质（细菌）混合，在有电解质存在的条件下，如两者对应则发生特异性结合，而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。 此法属定性试验，主要用于细菌鉴定和分型等。 1、1:10稀释的伤寒杆菌诊断血清、生理盐水； 2、菌种：伤寒杆菌、大肠杆菌菌液 3、洁净载玻片、记号笔、试管架等。 实验材料 实验流程 1 2 3 NS 1滴 伤寒诊断血清 1滴 伤寒杆菌菌液 大肠杆菌菌液 注意事项： 1、非实验物品放入抽屉以防污染； 2、玻片平端，谨防菌液污染 阴性 阳性 结果观察 ABO血型系统 2、ABO血型鉴定 原理： 人类ABO血型抗原分A、B两种。A型血者红细胞膜上有A抗原，B型血者红细胞膜上有B抗原，AB型有A、B两种抗原，O型则不含A、B抗原。 用已知的抗A或抗B抗体与受检者红细胞混合，抗A和或抗B抗体与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，根据其凝集状况判定受试者的血型。 1、抗A 及抗B抗体、生理盐水； 2、玻片、采血针、试管、滴管、消毒棉棒、牙签、记号笔等。 实验材料 A B 抗B 1滴 抗A 1滴 NS 10滴 血 1滴 红细胞悬液 红细胞悬液1-2滴 注意事项 1.消毒处干燥后再取血 2.滴管不可与抗体液面接触 3.牙签不可混用 步骤 结果观察 A型 B型 AB型 O型 抗A 抗B 二、沉淀反应 原理 可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定温度的条件下，经过一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀物。 环状沉淀 免疫扩散技术：单向免疫扩散、 双向免疫扩散 电泳技术：对流免疫电泳、免疫电泳、火箭免疫电泳 沉淀反应可在液体中进行，如 环状沉淀。 沉淀反应大多用半固体琼脂凝胶为介质进行琼脂扩散或称免疫扩散。 1、环状沉淀反应 将少量高浓度的抗体置于小试管底层，再将抗原沿管壁徐徐加入，使之重叠于抗体的上面，室温下静置数分钟，可以看到在抗原与抗体的接触面形成白色沉淀环。 此试验常用于抗原的定性试验。 实验器材 免疫血清（抗体） 抗原 小沉淀管、毛细吸管、生理盐水。 阳性 阴性 抗原 抗体 NS 抗体 将2只沉淀管分别标明1、2。 每只试管加入1/3高度抗体。 1管加入等量抗原