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《植物生物工程的应用
植物生物工程的应用20世纪末,人类基因组测序及基因草图的完成是分子生物学的重大进步,它推动了动物、植物和微生物的基因组测序,创立了基因组学这一分子生物学的分支。随着大规模核酸序列测定技术的完善和智能化,在不远的将来基因组测序将成为研究各种生命特征和生物进化规律的基本法法。在21世纪,人类有望完成绝大部分重要生物种类的基因图谱。植物生物工程是以基因工程为核心,利用植物的特性与功能,采用先进技术,以人们的意志或设计更新改造遗传物质,高效地获得预期性状的新物种。一般包括细胞工程,细胞组织培养,基因工程。本文主要介绍植物生物工程在药用和农业方面的应用。药用植物生物工程方面主要是在两个水平上进行研究的:(1)、组织和细胞培养。在濒危物种保护、重要资源快繁、退化种质脱毒改良和次生代谢物生产等领域应用前景广阔。分别从药用植物组织培养的外植体、培养基和培养条件、诱导子、抗逆性、产物药效成分、脱毒培养等方面和细胞培养的培养基和培养条件、高产细胞系的筛选、诱导子、产物药效成分、生物反应器、固定化培养等方面进行了总结研究。(2)、分子标记、遗传转化及功能基因研究。随着生物技术的发展和天然产物开发的不断深入,现代分子生物学研究的先进技术应用于药用植物研究领域,对传统中药的现代化发展起着越来越重要的作用。利用分子标记技术,对于药用植物种属间的亲缘关系多态性和系统树的建立发挥了重要作用;利用农杆菌介导遗传转化技术,可将有重要功能的基因通过基因重组转移到目的植株获得表达;对药用植物重要功能基因的研究将有助于明确这些功能的重要遗传和生理调控功能,为其进一步开发利用奠定基础。就药用植物的分子标记、遗传转化和功能基因研究进行综述。在农业方面主要介绍当时较强的领域应属植物组织培养技术已有10 多年的经验,如利用花药培养单倍体已培养出一批水稻,小麦, 烟草等新品种;茎尖脱毒快繁已应用于防治马铃薯退化和一些花卉植物。从原生质体或愈伤组织再生完整植株已在烟草,胡萝卜,油菜等获得成功。首先转基因植物的目的涉及到抗病毒,抗细菌,抗盐碱,抗虫,抗除草剂,在改良品质方面包括抗软化,雄性不育,改良营养品质等。 1. 植物生物工程在药用方面的应用 1.1 组织和细胞培养植物组织培养( plant tissue cul ture) 是指在无菌的条件下,将离体的植物( 根、茎、叶、花、果实、种子等) 、组织( 形成层、药花组织、胚乳、皮层等) 以及原生质体, 培养在人工配制的培养基上, 给予适当的培养条件, 使其长成完整的植株。通过组织培养, 还可生产人工种子 。 1.1.1发状根培养 发根农杆菌属革兰氏阴性细菌,能侵染大多数双子叶植物和少数单子叶植物及个别裸子植物,其Ri 质粒能诱导毛状根的产生。 近年来药用植物毛状根培养已在26 科100 多种植物中获得成功。主要在银杏、长春花、青蒿、甘草、商陆、人参、西洋参、何首乌、丹参等珍贵药用植物上获得了许多具有开发价值的次生代谢物,其中药用价值较高的有喹啉类、生物碱类、吲哚生物碱、莨菪烷生物碱、喹啉烷生物碱等、甙类(人参皂甙、甜菜甙)、黄酮类、醌类(紫草宁)、多糖类、蛋白质(天花粉蛋白)、超氧化物歧化酶等。1.1.2冠瘿组织培养通过毛状根获得高产量植物次生代谢物,主要适用于有效成份在根中的植物,对于有效成分在茎、叶等地上部分的植株则不适采用。冠瘿组织的培养不仅能产生原植物根中合成的有效成分,而且还能产生原植物地上部分特别是叶中合成的成分。1.1.3发状根和冠瘿组织共培养由于许多酶的表达具有组织器官特异性, 对地上和地下均能合成次生代谢物质的植株,但单纯毛状根培养或单纯冠瘿组织培养均不能合成的物质,可根据毛状根和冠瘿组织具有激素自主性的特点,在同一培养基中进行二者共培养,为某些重要次生代谢产物的生产提供新思路。1.1.3愈伤组织培养愈伤组织再分化可长成完整植株。 愈伤组织可作为生物反应器生产天然药用植物有效成分。郑树松等对栝楼的快速繁殖、愈伤组织的诱导及再分化以及不同培养体系中天花粉蛋白的表达进行了初步研究,结果表明:栝楼茎切段的腋芽和顶芽在MS+0.5、1.0mg/L 6-BA 培养基上可以快速繁殖;组织培养苗的叶MS+4.0mg/L6-BA+0.2mg/L IAA 的培养基上可形成愈伤组织,天花粉蛋白在愈伤组织中可获得一定表达。该愈伤组织在30天后可分化为绿苗,绿苗转MS+0.1mg/L NAA 的培养基可100%生根;生根苗移栽至土壤中100%成活。 1.2 细胞培养细胞培养是生物技术领域里的一个重要分支,通过药用植物的细胞培养,产生重要的次生代谢产物以及进行生理生化和遗传学研究,大部分传统药材的有效成分是次生代谢产物,采用大规模细胞培养是解决濒危药用植物及药效成分低的药用植物满足用药需求的重要途径,细胞培养具有生长速度快、周期短、产物
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