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【选修一】 复习归纳 一、培养基的成分： 1、培养基概念：给生物 (植物、动物组织或细胞、细菌、真菌和病毒) 的生长、繁殖提供营养的液体或固体。 2、微生物的培养基: 营养成分包括 ①碳源（供碳元素的有机物或无机物）、②氮源（供氮元素的有机物或无机物）、③水、④无机盐 二、微生物培养基的制作过程： ①根据培养对象的类型确定配方 ②称量并装入三角瓶中 ③调节好PH值 ④灭菌 ⑤ 60 0C三角瓶中培养基倒入培养皿中凝固成平板，或倒入试管中搁置斜面。 三、常见培养基的配方 ( 选修1+选修3) 1、细菌培养基: （1）成分: 蛋白胨 + 酵母提取液 + NaCl + 水 (PH: 一般要求中性偏碱的环境) （2）类型: ①LB固体培养基（加琼脂或琼脂糖） a、 培养皿中固体平板培养基：用于划线分离或稀释涂布分离微生物。 b、试管固体斜面培养基：用于保存菌种） ②LB液体培养基（不含琼脂）：常用于菌种的扩增繁殖或工业生产。 ③分离含脲酶的微生物培养基： 尿素、葡萄糖、氯化钠、K2HPO4、酚红(作为指示 剂）、琼脂糖(不含氮)、水（要点：只能以尿素作为唯一的氮源） 2、真菌培养基: 蔗糖+豆芽汁+无机盐 (PH: 一般要求中性偏酸的环境)。若要培养酵母 菌，则可只要葡萄糖溶液即可 3、生产果酒： (1)苹果果酒：苹果汁、蔗糖（加入蔗糖的目的有：①有利于酵母菌的繁殖 ②能提高果酒的酒精浓度） (2)葡萄酒：葡萄、蔗糖溶液 (用于扩增酵母菌，标志是排出气泡CO2 ) 4、生产果醋：果酒、水 (醋杆菌吸附在锯末上、通入空气、测PH 作为生产标志) 5、生产泡菜：多种蔬菜均可、调味品、食糖、盐 6、植物组织培养的培养基 ( MS培养基): 水分、大量元素、微量元素、有机成分(如蔗糖、 甘氨酸、肌醇等)。 注意:①蔗糖: 作为营养并维持渗透压 ②此时无植物激素和琼脂。 MS发芽培养基：MS培养基 + BA溶液（多）+ NAA溶液（少）+ 蔗糖 + 琼脂 MS生根培养基：MS培养基 + NAA溶液 + 蔗糖+琼脂（注意：此时不加入BA溶液是因为生根时所需的细胞分裂素少，丛状苗本身可产生少量的细胞分裂素） 【说明: BA（苄基腺嘌呤）是细胞分裂素类似物，NAA（萘乙酸）是生长素类似物。】 四、微生物的无菌操作要领： （1）培养基要灭菌 (高压蒸汽灭菌) （2）所用的器皿要灭菌 (高压蒸汽灭菌) （3）操作环境 (超净台) 和双手要消毒 (70%酒精擦拭) （4）菌种的转移接种要在超净台中酒精灯的火焰旁进行 （5）实验结束时，培养用过的培养基一定要经过高压蒸汽灭菌后才能倒掉。 五、几种消毒或灭菌的方法： 1、一般的培养基(耐高温)、器皿：高压蒸汽灭菌（121 0C、1 Kg/cm2 、15 min） 2、培养基中含葡萄糖：为了防止葡萄糖高温分解碳化，要用500g/cm2 、90 0C、30min。 3、尿素固体培养基: 培养基经121 0C下灭菌后，冷却至60 0C时，再将尿素溶液通过G6玻璃漏斗过滤加入。G6玻璃砂漏斗过滤在使用前也要在121 0C下用纸包好灭菌。 4、超净台灭菌: 打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。 5、双手用70%酒精擦拭消毒。 6、无菌空气可以用通气管中塞上脱脂棉通入。 7、制果酒的葡萄: 用高锰酸钾溶液消毒 8、植物组织培养时的外植体消毒：先在70%乙醇中浸泡30秒，再放入5%次氯酸钠中浸泡5分钟，然后用另一5%次氯酸钠溶液浸泡5分钟，最后在超净台中用无菌水清洗。若外植体是取自进行过无菌培养的幼苗，则外植体不需要上述的消毒过程。 9、接种环灭菌：在酒精灯外焰处灼烧 10、涂布器（即玻璃刮刀）灭菌：保存在70%乙醇中，使用时放在酒精灯火焰上，等到刮刀上的火焰熄灭。 六、微生物的分离和计数问题： 1、划线分离法 （1）优点：操作方法简单 （2）不足：菌落不容易分开，分离效果较差。 （3）要领：①划线前都要灼烧接种环灭菌（第一次灭菌是为了消灭接种环上原有的微生物、后面在每一区划线之前灼烧是为了保证接种的菌种只能来自前一次划线的末端。 ②划线的第一区与最后一区不能相连。 (4) 说明：此方法不能用于计数。 2、稀释涂布分离法： （1）优点：单菌落更易分开，且可用于对微生物间接计数 （2）不足：操作复杂 （3）要领：①将菌液稀释(10-4、10-5)，取0.1mL不同稀释度的菌液，加在培养基的固体表 面，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上，然后进行倒置培养。②每种稀释度涂三个平板。 ③通常以每个培养皿有20个以内的单菌落最为合适。 （4）溶液中微生物数目的换算： 平板上菌落平均数×稀释倍数×（溶液的体积除以0.1mL） 七、微生物分离的意义： 单菌落的分离是消除杂菌污染