2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体辩析.pptVIP

融合的原生质体AB 再生细胞壁 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 原生质体B 原生质体A 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 回顾植物体细胞杂交过程 去 壁 植物细胞和动物细胞在结构上有什么区别？ 动物细胞没有细胞壁、叶绿体和液泡 既然植物细胞和动物细胞在结构上有所区别，那么动物细胞之间可以进行杂交吗？杂交过程是否与植物细胞完全一致？ 学习目标： 1、简述动物细胞融合和单克隆抗体制备的过程 2、说出动物细胞融合的意义，说明单克隆抗体在医学实践中的应用，并说其应用实例 重点、难点： 单克隆抗体的制备过程 一、动物细胞融合 动物细胞融合也称 ，是指 动物细胞结合形成 细胞的过程。 融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的 细胞，称为 。 1 概念： 细胞杂交 两个或多个 一个 杂交细胞 单核 2 过程： 诱导方法 物理法：离心、振动、电击等 化学法：聚乙二醇 生物法： 灭活的病毒 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 诱导方法 灭活病毒诱导融合的过程： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 2、为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 1、动物细胞融合所依据的原理是什么？ 细胞膜的流动性 问题讨论 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振动、电刺激）； 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 获得杂种植株 制备单克隆抗体 3、意义： （1）使远缘杂交成为可能。 （2）是研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤、 和生物新品种培育的重要手段。 （3）为单克隆抗体开辟了新途径。 在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是 A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同 Ｂ 回 顾 1、抗体的化学本质？ 2、抗体由什么细胞产生？ 3、抗体的作用特点？ 4、抗体的分布？ 二、单克隆抗体 思 考：如何获取某种特定抗体？ 概念： 由一个细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 1、抗体的传统生产方法 再从动物血清中分离抗体 该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。 注入 浆细胞 动物体内 某抗体 某抗原 思考与探究： 如何获得大量化学性质单一、特异性强的抗体？ 一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖 杂交瘤细胞 既能分泌一种特异性抗体 又能无限增殖 1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒设想： 2、单克隆抗体的制备过程 任务： 对照图2-24 单克隆抗体制备过程示意图，阅读课本P53页最后一段和P54页第一段内容，并思考下列问题： 1、在获得B淋巴细胞之前要对小鼠做何种处理？ 2、用于杂交的B淋巴细胞具体指哪一种细胞？ 给小鼠注射特定的抗原蛋白 浆细胞（或效应B细胞） 单克隆抗体的制备 单克隆抗体的制备 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 讨论 1、若只考虑细胞两两融合的情况，会出现哪些类型的融合细胞？ B淋巴细胞与B淋巴细胞融合，骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合，B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合 2、是否所有的杂交瘤细胞都能产生某一特定抗体？ 不是，有些产生的是别种抗体 3、由特定的B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞融合成的杂交瘤细胞具有什么特点？ 既能无限增值，又能产生特异性抗体 4、单克隆抗体的制备过程需要经过几次筛选？每次筛选的目的是什么？ 2次，第一次是为了筛选出杂交瘤细胞，第二次是为了获得能产生特异性抗