1糖化学生化详解.pptVIP

多糖的分离纯化及降解 （一）多糖的提取与分离 1、胶类：木聚糖及半乳糖等，难溶于水，溶于稀碱液 原料粉碎后用0.5mol/L NaOH水溶液提取，提取液经中和及浓缩等步骤，最后加入乙醇，即得粗糖沉淀物 2、易溶于温水，难溶于冷水的多糖，可用70~80℃热水提取，提取液用氯仿：正丁醇（4:1）混合除去蛋白质，经透析、浓缩后再加乙醇得粗多糖产物。 3、黏多糖的提取 （1）碱液提取法（软骨素）：糖肽键对碱不稳定 原料经预处理后用0.5mol/L NaOH溶液4 ℃提取，后用酸中和。蛋白质可用调pH、加热或用陶土吸附法去除，最后用乙醇沉淀可获得成品。 （2）蛋白水解酶消化法（用此法从组织中释放出黏多糖） 利用专一性低的蛋白酶，如木瓜蛋白酶及链霉素以进行广泛的蛋白质水解。经消化后的提取液中主要含有低分子量的蛋白消化产物及残存蛋白质等杂质。蛋白杂质用5%三氯乙酸沉淀去除，小分子杂质用透析袋去除。最后加入乙醇可得粘多糖沉淀。 （二）多糖的纯化 1、分级沉淀法 用乙醇进行分级分离是分离多糖混合物的经典方法，适用于大规模分离。 2、凝胶过滤法 利用凝胶具有立体网状结构，当含有不同聚合度的糖溶液流经适当的凝胶柱时，小分子易于扩散进入孔中，而大分子则不易扩散，洗脱时，大分子的糖比小分子的先洗脱下来。 3、离子交换层析：DEAE-纤维素，适于分离各种酸性、中性多糖，在pH为6时酸性多糖吸附于交换剂上，中性多糖不吸附，然后用逐步提高盐浓度的洗脱液进行洗脱进而达到分离。 4、季铵盐络合法 黏多糖的聚阴离子与某些表面活性物质，如十六烷基三甲基溴化铵中的季铵基阳离子结合生成季铵络合物，这些络合物在低离子强度的水溶液不溶解。当离子强度增大时，这些络合物可以解离并溶解。 （二）多糖的纯化 5、制备性区带电泳 根据多糖的分子大小、形状及所带电荷的不同，可用电泳法分离。 6、固定化凝集素的亲和层析法 凝集素能专一地、可逆地与游离和复合糖类中的单糖和寡糖相结合，利用固定化凝集素亲和层析可分离纯化糖蛋白，不破坏糖蛋白活性。如固定化的刀豆凝集素，能专一的与甘露糖基结合。 （二）多糖的纯化 （三）多糖的降解 1、化学降解法（肝素、甲壳素） 肝素降解：亚硝酸控制降解法，亚硝酸首先作用于肝素分子中的N-硫酸葡萄糖胺单位，脱去HSO4- 形成-NH2， -NH2与HNO2发生重氮化反应，再放氮的同时糖苷键断裂，电子转移，缩合生成2,5-脱氢甘露糖或脱氢甘露糖醇，可得到分子量为6KD的片段分子。 甲壳素降解：在酸性条件下，用10%的NaNO2溶液处理甲壳素，可使分子链上的-NH2基团发生重氮化反应，消除-NH2，使分子链断裂，得到末端上带有醛基的低聚糖，达到降解的目的，再以NaBH4溶液还原，制得低分子甲壳素。 （三）多糖的降解 2、酶法降解 肝素降解：肝素酶是一类能降解肝素类物质的裂解酶，能特异性的断裂肝素链上具有特殊修饰的不同序列，从而产生不同的寡糖片段。 甲壳素降解：首先由水解甲壳素糖苷键的降解酶系统，如外切酶从多糖链的非还原端开始以二乙酯壳二糖为单位依次酶解，内切酶则随机的断裂糖苷键， β-N-乙酰葡萄糖胺酶将双糖水解成单糖。 肝素黄杆菌 （三）多糖的降解 3、辐射降解法 甲壳素降解：一般采用60Co辐射源在不同剂量下对甲壳素进行照射，使分子产生电离或激发等物理效应，进而产生化学变化，即可使分子间形成化学键-辐射交联，又可导致分子链断裂-辐射降解。 反应易控制，无污染，品质高。 化学法：污染严重 酶法：产量低，成本高，难以进行批量生产。 第一篇 生命的分子基础 糖的化学 第 一 章 绪论 糖的生物学意义 糖的分类 多糖的分类 多糖的化学结构 多糖的理化性质测定 概 述 分 类 理化性质 生物功能 分析分离 内 容 提 要 多糖的提取、纯化和降解 第 一节 概述 一、糖的概念、分布 组成糖类化合物的主要元素 为C、H、O 俗称 碳水化合物 Cn(H2O)m（不够全面） 化学定义 多羟基醛或酮及其缩聚物和 衍生物的总称。 所有生命机体中，其中： 动物：含糖量不超过其干重的2%。 植物：含糖量占其干重的85-90%； 微生物：含糖量占其菌体干重10-30%； 韧带－结构糖 结缔组织－结构糖 肌糖原－能源 动物干重2％ 供作能源 具有结构功能 具有多种生理活性和功能 二、糖的生物学功能 细胞壁中结构糖 储备能源糖 植物干重90％ DNA、RNA 结构糖 昆虫外骨骼－糖 细胞表面识别标记－糖 糖蛋白、糖脂、信息分子糖 细胞 识别 和信 息传 递的 重要 参与 者。 按组成 分类 单糖 寡糖 多糖 按C原子数目 按羰基位置 （丙、丁、戊、己等） （醛糖、酮糖） 复合糖：与非糖物质结合的糖。