8第二章提取分離和鉴定的方法和技术.doc

枣庄科技职业学院教案 【 8 】 周次 第 三 周，第 2-3 次课 备 注 章节 名称 第二章 §2五、六、七 授课 方式 理论课（√）；实验课（ ）； 实习（ ） 教学 时数 2 教学目的及要求 1.掌握柱色谱的操作要点 2.掌握硅胶吸附色谱及聚酰胺色谱的原理及操作要点 教学重点与难点 重点： 柱色谱的操作要点 难点： 硅胶吸附色谱及聚酰胺色谱的原理及操作要点 教 学 内 容 备 注 第二章 §2分离精制和鉴定的方法和技术 五、透析法 小分子物质（无机盐、氨基酸等）在溶液中可通过半透膜，而大分子物质如多糖、蛋白不能通过半透膜的性质达到分离的方法。 六、 盐析法 水提液中，加入无机盐至饱和，有效成分沉淀析出，其它水溶性杂质溶于水。 如： 三七的水提液中加硫酸镁→三七皂甙乙↓ 三颗针中提取小檗碱→氯化钠或硫酸铵盐析。 七、色谱法 1.定义： 是一种依据物质的物理化学性质（如极性、溶解性、离子交换能力、分子大小等）的不同而进行分离分析的方法。 2.基本原理： 是利用混合物中各成分在固定相和移动相中吸附力、分配及其亲和力的差异而达到分离。 3.分类： （1）按移动相种类的不同分为：气相色谱和液相色谱 （2）按操作方式的不同分为：柱色谱、纸色谱和薄层色谱 （3）按色谱原理不同分为：吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱 (一) 吸附色谱法 物理吸附（physical adsorption）：也称表面吸附，常见如硅胶、氧化铝、活性炭吸附。是目前吸附色谱最主要的分离依据。 物理吸附基本规律—相似者易于吸附 吸附三要素：吸附剂、溶质、溶剂。 常用的吸附剂有： 硅胶、氧化铝、活性炭、聚酰胺、大孔吸附树脂等。 1.活性炭：是非极性吸附剂，对非极性物质具 有较强的亲和力。 吸附规律： ①芳香族化合物吸附力＞脂肪族化合物 ②分子量大的化合物吸附力＞分子量小 ③水中对溶质的吸附力＞有机溶剂中对溶质的吸附力 2.硅胶、氧化铝：为极性吸附剂。 （1）吸附原理： 硅醇基与化合物形成氢键 硅醇基与水形成氢键 硅胶吸附的水分愈多，吸附其他化合物的能力愈弱。 吸水量超过17％，不能作为吸附剂了。 在100～110℃加热30min时即可除去水，恢复吸附活力，这一过程称为硅胶的活化。 （2）吸附规律： ① 对强极性物质的亲和力强于弱极性物质。 ② 溶剂极性弱，吸附剂对溶质吸附力强，溶剂极性增强，吸附剂对溶质吸附力弱。 ③溶质被硅胶、氧化铝吸附，当加入极性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱下来。 3. 聚酰胺：属于氢键吸附，不但适用极性物质也适用于非极性物质的分离。 特别适合酚类、醌类、黄酮类、鞣质的分离。 4.大孔吸附树脂： 大孔吸附树脂是一种没有可解离基团具有大孔结构的高分子吸附剂。分为非极性与中等极性两类。 （1）吸附原理： 吸附性与分子筛原理相结合的分离材料。 （2）影响因素： 大孔吸附树脂的特性、被分离物质 及溶剂的性质均影响着分离结果。 ①分子极性 极性大成分——易被极性树脂吸附，被分离成分与大孔树脂形成氢键的基团越多，吸附力越强，极性大的有机溶剂合适 。 极性小的成分——易被非极性树脂附，极性小洗脱剂，洗脱能力强。 ②分子体积 对非极性大孔树脂而言，化合物体积越大，吸附力越强，这与大体积分子的疏水性有关。 ③溶液的pH 酸（碱）性化合物——适当的酸（碱）性溶液中吸附； 中性化合物——中性溶液中可被充分吸附 ④洗脱剂 水、醇类、丙酮、乙酸乙酯等。 (二)液-液分配色谱法 （1）正相分配色谱： 载体：硅胶（含水量超过17％已失去吸附性，可作为载体）、硅藻土、纤维素等 固定相：强极性溶剂，如水、缓冲液等 流动相：氯仿、乙酸乙酯等弱极性有机溶剂 洗脱规律：极性小成分先洗下 极性大成分后洗下 （2）反相分配色谱： 亲脂性有机溶剂——固定相 水或亲水性溶剂——移动相 固定相：可用石蜡油、反相硅胶RP-18、RP-8、RP-2 流动相：则用水或甲醇等强极性溶剂 洗脱规律：极性大成分先洗下 极性下成分后洗下 (三) 离子交换色谱法 酸性、碱性及两性基团的化合物在水溶液中多呈解离状态，可以与离子交换树脂上的基团交换，从而与其它非解离性物质分开。 应用:分离具有解离能力的酸性、碱性及两性化合物，如生物碱、氨基酸、有机酸、酚类、肽类等天然药物化学成分。 (四) 凝胶色谱法(也称分子筛滤过法、凝胶渗透色谱法) 利用凝胶的三维网状结