实验二ELISA总结.ppt

* * 江西医学院免疫学教研室 免疫标记技术 用荧光素、酶或放射性核素等标记物，标记抗体或抗原，进行的抗原抗体反应，是目前应用最广泛的免疫学检测技术。标记物与抗原或抗体连接后，不改变其免疫特性，并提高了方法的灵敏度，具有快速、定性、定量甚至定位等优点。 标记技术检测抗原 免疫标记技术检测抗体 免疫荧光法 是用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发出荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC)和藻红蛋白(PE)。前者发黄绿色荧光，后者发红色荧光。 免疫荧光法可用于检查细菌、病毒、螺旋体等的抗原或抗体，帮助传染病的诊断。此外，还用于鉴定免疫细胞的CD分子，检测自身免疫病的抗核抗体等。 免疫荧光实验 荧光标记B细胞表面的免疫球蛋白 （1）直接荧光法 （2）间接荧光法 免疫荧光实验 酶免疫测定法 本法将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后显色，以颜色变化判断试验结果。目前常用的方法有酶标免疫组化法和酶联免疫吸附法。前者测定细胞表面抗原和组织内的抗原，后者主要测定可溶性抗原或抗体。用酶标测定仪测定光密度值（OD）反映抗原含量，常用于标记的酶有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）。 酶联免疫吸附试验（ELISA） 基本方法：将已知的抗原或抗体吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）表面，使抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。 酶联免疫吸附试验（ELISA) ①双抗体夹心法：用于检查特异抗原 不同抗原决定基 ②间接法：用于检查特异抗体 免 疫 印 迹 法