【2017年整理】不同测定方法对饲料粗蛋白测定结果影响的研究.docVIP

不同测定方法对饲料粗蛋白测定结果影响的研究 扬州大学动物科学与技术学院/王潍波 摘 要 试验采用国标法、凯氏定氮法、强碱直接蒸馏法、双氧水测定法对鱼粉、玉米蛋白、豆粕三种饲料原料的粗蛋白含量进行分析测定，旨在探讨4种方法的测定误差，以期找到最好的测定方法。试验结果表明，4种方法的测定结果差异不显著（P0.05）,均可用于粗蛋白的测定；其中强碱直接蒸馏法测定是最好的，可以节省试剂，减少实验经费，在一般饲料质量检测中可进行推广。关键词 测定方法；饲料；粗蛋白；影响在传统的饲料粗蛋白测定方法即国标法中，由于操作方法和实验仪器的原因，样本经消化、蒸馏、滴定诸道工序，易造成误差，费时费电。目前生产中常用的方法有国标法、凯氏定氮仪法、强碱直接蒸馏法、双氧水法、双缩脲法等。现有研究资料表明，后四种方法均优于国标法，但各种方法都各有优缺点，本研究以几种不同的蛋白质测定方法测定了一些有代表性的饲料原料，通过比较，以期找到最好的测定方法。1 试验材料1.1 检样的采集、制备直接在生产单位采集三种有代表性的原料检样：鱼粉、玉米蛋白粉、豆粕，分别采用四分法将检样缩至500g，粉碎后并全部通过40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分变化或变质。1.2 主要试剂硫酸：化学纯，含量为98%，无氮；混合催化剂：0.4gCuSO4，6gK2SO4或Na2SO4，均为化学纯，磨碎混匀；NaOH：40%水溶液，化学纯；硼酸：2%水溶液，化学纯；混合指示剂：甲基红、0.1%乙醇溶液、溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两者等体积混合，在阴凉处保存期为3个月；0.1moL/LHCL标准溶液：将8.3mL分析纯HCL注入1000mL蒸馏水中；0.02moL/LHCL标准溶液：将1.67mL分析纯HCL注入1000mL蒸馏水中；蔗糖：分析纯；硫酸铵：分析纯，干燥；硼酸吸收液；双氧水：分析纯，含量为30%；酒石酸钾钠：分析纯；碘化钾：分析纯；蛋白质标准溶液(4g/dL)购自北京中生生物工程高技术公司。1.3 主要仪器实验用样品粉碎机或研钵；40目分析筛；分析天平：感量0.0001g；消煮炉或电炉；酸式滴定管；凯氏蒸馏装置；凯氏定氮仪；电热恒温水浴锅；玻璃烧杯；25mL具塞玻璃试管；25 mL、1000mL容量瓶；1 mL、 5mL、10mL吸量管；100mL量筒；托盘天平等。2 测粗蛋白的不同的分析方法2.1 国标法2.1.1 原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白的含量。2.1.2 试剂 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮；混合催化剂：0.4gCuSO4，6gK2SO4或Na2SO4均为化学纯，磨碎混匀；NaOH：40%水溶液，化学纯；硼酸：2%水溶液，化学纯；混合指示剂；0.1moL/LHCL标准溶液；0.02moL/LHCL标准溶液；蔗糖：分析纯；硫酸铵：分析纯，干燥；硼酸吸收液。2.1.3 仪器 实验用样品粉碎机或研钵；40目分析筛；分析天平；消煮炉或电炉；酸式滴定管；凯氏蒸馏装置；凯氏定氮装置。2.1.4 操作步骤2.1.4.1 试样的消化 称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg），准确至0.0002g，小心无损的将样本放入100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。加入6.4混合催化剂与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热，开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内，如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗，再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热至消化完毕。2.1.4.2 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。2.1.4.3 空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1moL/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL，消耗0.2moL