第五章生物碱报告.ppt

第五章 中药制剂中各类化学成分分析 第一节 含生物碱（alkaloid）类成分的分析 生物碱的分布 含生物碱量多的科有罂粟科、防已科、茄科、小檗科、毛茛科、芸香科、夹竹桃科、马钱科及茜草科等，中药有三尖杉、麻黄、黄连、黄柏、乌头、延胡索、粉防已、颠茄、洋金花、贝母、百部等。 溶解度 多数极性较小，属于亲脂性碱，游离状态下几乎不溶于水。成盐后则水溶性增加，易溶于水及醇中，不溶或难溶于苯、氯仿、乙醚等。生物碱和其盐这一相反的溶解性质可以用于它的提取、分离和精制。 酸碱性 生物碱结构中含氮，多呈碱性。能与无机酸、有机酸成盐 N： + H+X- [ N：H]+X- 碱性强弱为：季胺 叔胺 仲胺 伯胺 酰胺 沉淀反应 三、含生物碱类成分中药制剂的定性鉴别 常用的提取溶剂系统 非极性溶剂系统：一般先用10%的氢氧化铵、碳酸氢钠或氢氧化钠碱化，使生物盐游离，后用氯仿或乙醚提取，缺点是不能提出水溶性生物碱。 极性溶剂系统：极性较大的生物碱可用中性甲醇、乙醇、酸水（常用0.1%--1%的盐酸、硫酸等）以及缓冲液提取，但提出的杂质较多，需净化。 混合溶剂系统：用不同极性的溶剂按不同比例混合，可较好地进行提取。 （一）一般理化鉴别 （二）色谱鉴别 1、薄层色谱法吸附剂的选择：硅胶本身有弱酸性，与生物碱成盐，使吸附力增强，若用中性展开系统，其Rf值小，易拖尾。一般用碱性展开系统或在中性中加少量碱性溶剂，如二乙胺、氢氧化铵或用氨水饱和（展开缸中放一小杯氨水）或制备碱板（在硅胶板中加稀碱溶液）。碱性氧化铝因本身带有碱性，故用中性展开剂即可使生物碱得到很好的分离。 脂溶性生物碱----用吸附薄层法，用活度较大的吸附剂如硅胶、氧化铝。 水溶性生物碱----用硅藻土、纤维素作为支持剂，硅胶板也可以 展开剂的选择 脂溶性生物碱采取极性小的溶剂 水溶性用极性大的溶剂 但一般用混合溶剂较多，单一溶剂少 显色剂的选择 某些生物碱本身有颜色，可直接于可见光下观察。 有紫外吸收的可用紫外检测。 但大部分生物碱无色且无荧光，则需喷显色剂，最常用的显色剂有改良碘化铋钾、碘蒸气、氨蒸气 2、纸色谱法 3、高效液相色谱法 4、气相色谱法 四、含生物碱类成分中药制剂的含量测定 1、化学分析法 2、?分光光度法 （1）直接测定法 （2）离子对萃取比色法 酸性染料比色法 在一定pH介质中，生物碱B可与氢离子H+结合生成生物碱盐的阳离子BH+，而酸性染料在此条件下解离为阴离子In-,则阴阳离子能定量结合生成有色化合物（离子对）。 再用合适的有机溶剂将该离子对提取，测定其吸收度值，进而对生物碱定量。 苦味酸盐法 雷氏盐比色法 （三）色谱法 1、高效液相色谱法 离子对色谱、正相色谱、反相色谱。 （1）、流动相方面的改进 A：加入硅醇基抑制剂，可在流动相中抑制或掩蔽固定相表面的游离硅醇基的活性，使生物碱易出峰，峰形好。最常用的有二乙胺、三乙胺； B：加入离子对试剂，使其与生物碱生成离子对而掩蔽其碱性基团，从而不会与固定相表面的硅醇基作用；常用辛烷磺酸钠或十二烷基磺酸钠表面活性剂。 C：也可以加入季铵盐试剂， ? [R3SioH] + [A] ≒ [R3SioH.A] 硅醇基 季铵盐 复合物 连续添加季铵盐时，平衡向右，因而被分离的生物碱和硅醇基之间的作用被阻碍，从而使生物碱得到很好的分离。 常用有溴化四甲基胺 D：在流动相中加入一定浓度电解质缓冲盐，可改变流动相离子强度，稳定pH值及促进离子对作用，从而改善峰形及分离效果。 通常用磷酸盐缓冲液，但操作时由于存在盐，做过后应充分洗柱，以免腐蚀柱子。 （2）、固定相方面的改进 A：选择C链较短的键合相硅胶为固定相，如C8比C18好，原因是由于硅烷的C链较短则覆盖硅胶的表面较好，只有较少的游离硅醇基。 B：封尾技术可使填料的键合更彻底，常用三甲基氯硅烷（TMCS）处理，可减少残余羟基，增加单体覆盖度。 （3）、增加流动相的脂溶性 （4）、升高柱温 2、薄层色谱法 3、气相色谱法 适用于有挥发性的、遇热不分解的生物碱类，如麻黄碱、槟榔碱、苦参碱和颠茄类生物碱。 思考题：乌头（注1）的容量法测定的操作程序是：取样品精密称定，加无水乙醇溶液并放置24小时，过滤，减压回收乙醇，至残留液至小量时加2%盐酸溶液（注2），移入分液漏斗中，用乙醚萃取3次（注3），在样品液中滴加氨试液调PH9 10（注4），再用乙醚-氯仿（3:1）混合液提取３次（注5），合并萃取液，蒸干，加无水乙醇溶解．精密加入硫酸液（0.01mol/l）与甲基红指示剂３滴，用氢