【2017年整理】水微生物学实验指导书.docVIP

PAGE PAGE 12 水微生物学实验指导书 武汉科技大学城市建设学院 给排水工程系 2007.12 目录页 实验一 光学显微镜的使用及微生物形态的观察 活性污泥生物相的观察 实验二 培养基的制备及灭菌 微生物的纯种分离及计数 实验三 微生物生理生化特性 实验一 光学显微镜的使用及微生物形态的观察 一、实验目的 1.了解普通光学显微镜的构造，学习显微镜的使用方法和保养方法。 2.观察蓝细菌、霉菌、酵母菌、放线菌的个体形态，学会生物图的绘制。 二. 实验内容 1．显微镜的使用方法和保养方法 2．微生物形态的观察 三、实验仪器、设备及材料 1.光学显微镜、载玻片、盖玻片等 2.示范片：颤藻、曲霉、青霉、酵母菌、放线菌。 四、实验原理 显微镜的结构和各部分的作用 图1是微生物实验常用的双目电光源生物显微镜，其构造分机械和光学两部分： 机械部分主要包括： 1．镜筒 镜筒是双筒，两筒间距离可调， 长度一般是160mm。它的上端装有接目镜，下端有回转板。回转板上一般装有3个接物镜。 2．载物台 载物台是放置标本的平台，中央有一圆孔，使下面的光线可以通过。两旁有弹簧夹，用以固定标本或载玻片。有的载物台上装有自动推物器。 3．调节器 镜臂旁有两个螺旋，大的叫粗调节器，小的叫细调节器，用以升降载物台，调节接物镜与所需观察的物体之间的距离。 光学部分主要包括： 1．接目镜 一股使用的显微镜具有2—3种放大倍数的接目镜，其上常刻有“5×”、“10×”或“16×”等数字及符号。意即使用时可放大5倍、10倍或16倍。观察微生物时常用放大10倍或16倍的接目镜。 2．接物镜 接物镜装在回转板上．可分低倍镜、高倍镜和油镜3种，其相应的放大倍数常是10、40 (45)、100。通常显微镜的放大倍数等于接物镜与接目镜放大倍数的乘积。例如：用放大40倍的接物镜(高倍镜)与放大10倍的接目镜时所得的物象的放大倍数为40×10＝400。如果用放大100倍的接物镜则放大倍数为100×10＝1000。接目镜装在镜筒上端，在使用过程中并不经常变动，所以通常所谓的用低倍镜、高倍镜或油镜的观察主要是指使用不同的接物镜而言的。 油镜的放大倍数最大(100)。放大倍数这样大的镜头，焦距就很短．直径就很小。所以自标本玻片透过的光线，因介质密度(从玻片至空气，再进入油镜)不同、有些光线因折射或全反射，就不能进入镜头，致使射入的光线较少，物象显现不清。所以为了不使通过的光线有所损失，须在油镜与玻片中间加入和玻璃折射率(M＝1.52)相仿的镜油(香柏油M＝1.5l5)。因为这种接物镜使用时须加镜油，所以我们称它为油镜。一般的低倍镜或高倍镜使用时不加油，所以也称之为干镜。 图2 3．聚光器 聚光器在载物台的下面，用来集合由光源过来的光线。聚光器可以上下调整，中央装有光圈。用以调节光线的强弱。当光线过强时．应缩小光圈或把聚光器向下移动。 图2 4．光源 光源装在显微镜的最下方，带有开关，其光亮也可调节。 五、实验步骤 (一)显微镜使用和保护的方法 1．低倍镜的使用法 (1)置显微镜于固定的桌几上，接上电源，打开开关，调节合适光量。 (2)拨动回转板，把低倍镜移到镜筒正下方，和镜筒连接而对直。 (3) 两眼向接目镜里观察，同时调节两目镜镜筒间的距离，使两接目镜中的视野重合。 (4)把载玻片放到载物台上，要观察的标本放到园孔的正中央。 (5)将粗调节器向上旋转，同时眼睛注视接物镜，以防接物镜和载玻片相碰。 镜头的尖端距载玻片约5mm时即停止旋转。 (6) 两眼向接目镜里观察，同时把粗调节器向下旋转。如标本显出，但不十分清楚，可用细调节器调节，至标本完全清晰为止。 (7)假如因旋转粗调节器太快，致使超过焦点，标本不能出现时，不应在眼睛注视接目镜的同时向上旋转粗调节器，必须从第(5)步作起，以防因没有把握的旋转，使接物镜与载玻片碰触，造成损坏。 (8)在观察时，两眼都要同时睁开。 2．高倍镜的使用法 (1)使用高倍镜以前，先用低倍镜检查，在用低倍镜找到观察目标后，若需要进一步放大观察，将目标移到视野中央。 (2)拨动回转板使高倍和低倍两镜头互相对换。当高倍镜移动到载玻片时，往往镜头十分靠近载玻片。这时必须注意是否因高倍镜靠近的缘故而使载破片也随着移动。如果载玻片有移动的现象，则应立刻停止推动回转板。把高倍镜退回原处，再按照使用低倍镜的方法，重新校正标本的位置。用转换器将高倍镜移到镜筒下方，将光量调大一点。 (3)当高倍镜已被推到镜筒下面时，向镜内观察所显现的标本，往往不很清楚，这时可旋转细调节器使之