多利羊带来的挑战与困惑[精选].pptVIP

1952 豹蛙 囊胚细胞核 去核卵母细胞 蝌蚪 可育的蛙 爪蟾：肠上皮细胞核仍保持全能性 爪 蟾 的 核 移 植 实 验 爪蟾：肠上皮细胞核仍保持全能性 1978 黑斑蛙 (童第周) 去核未受精卵细胞 蛙红细胞核 蝌蚪 1981 克隆小鼠的实验 融合 Illmensee Hoppe 细胞核受体 甲品种小鼠 收集受精卵 的克隆小鼠实验 细胞核供体 乙品种小鼠 收集囊胚期细胞 团分散成单细胞 取核 去核 融合 将核注入已去核 的受精卵中 植入假母子宫 在培养皿中培 养至细胞团 产出小鼠 核移植小鼠（克隆小鼠） 长成成鼠，呈核供体小 鼠性状 以上实验得出的结论 囊胚阶段的细胞乃至成熟的体细 胞，其细胞核仍具有全能性——可能 发育成完整个体。 细胞核保持着完整的全套基因组。 看来，关键在于细胞质。细 胞质中有着决定细胞分化全能性 的物质，称为分化决定子。 后来实验证明，细胞质中的分 化决定子，是 RNA。它们对紫外线 敏感，对 RNase 敏感。 在卵子形成过程中，卵母细胞中 含有 2－5 万种 mRNA，每种约 600 个拷贝。这些 RNA 构成母体信息， 决定受精卵的发育潜能。 信息体（informasome） 在卵子中，母体信息以核糖核酸 蛋白（RNP）颗粒形式存在，其沉降 系数比核糖体还大，称为信息体。 到 1980s 初，克隆实验已用小 鼠取得成功。 囊胚细胞核＋去核受精卵 那么，为什么20世纪末的多利 羊实验成功仍会引起这么大的震 动？ ? 从囊胚细胞核到分化成熟的体细 胞核是一个大进步。 ? 从实验小鼠 到羊，也有所不同。 ? 最重要的是时机：1980s 初到 1990s 末。 三、多利羊实验的设计和实施 1、实验过程 严密的实验设计 精心的操作过程 严格的结果检验 实验过程 细胞核受体 Scottish Blackface ewe 细胞核供体 Doll dorset BlackWlesh Finn Dorset ewe ewe Mountain 9天胚 26天胎羊 6岁母羊孕期 最后三个月 胚细胞 胎羊细胞 乳腺细胞 注射促性腺激素释放激素 经 28-33 h 排卵 培养于0.5%胎牛血清培养基 中， 使从生长周期中出来停顿于G。 34~36 h 取出核 分别进行 培养在羊输卵管上 6 天，分裂成长至桑椹期或囊胚期 细胞融合 移入假母（苏格兰黑脸母羊）子宫, 1￣3 胚/头假母 50￣60天，超声检查，21头胎羊， 以后 每 14天查一次。 最后产出八头小羊分属三个核供体来源。 胎羊丢失率：62%（13头） 以形态特征，DNA microsatellite analysis 产出小羊均显示供体羊特征 2、实验成功的关键，血清饥饿 ? 使细胞核和去核卵细胞处于细胞周 期中相匹配的阶段。 ? 使结合在基因（DNA）上的调控 蛋白脱落下来。 ? 重新编程（repreogram, remodel ） 对多利羊实验的质疑。 质疑：来自乳腺的细胞究竟是不 是分化成熟的体细胞？(原来供细胞的 母羊已死) 回答：在 Nature 原文中已说明， 怀孕期间胚胎细胞 可能进入母体， 1/106 可能性。需要进一步实验。 四、多利羊实验的理论意义和实 践意义 1、理论意义 ★证实分化成熟的动物细胞的细胞核仍 保持完整基因组，具有潜在的全能性。 ★证实细胞质对胚胎发育分化有决定性 作用。 2、实践意义 ? 蛋白质－多肽类药物 (胰岛素、凝血因子、干扰素、生 长因子等) 目前产值已超过1000亿美元 80年代初期到新世纪 这10年内基因工程用于生产蛋白质— 多肽类药物有很大发展，技术已趋完善。 细菌、酵母表达系统——糖修饰 、 蛋白质折叠。 动物细胞培养——难度大 、成本高。 转基因动物——技术已突破。 转基因动物提高了蛋白质——肽类药物的产量 产量 细胞培养法 转基因羊羊奶中 5% 25%—50% 英国罗斯林研究所和 PPL 制药公司联合， 50 只转基因羊，已传四代。希望用克隆法生 产 4000 只基因工程奶羊。 乳腺生物反应器 荷兰 生产EPO的转基因牛 年产值 40亿美元 英国 生产α-胰蛋白酶 一杯羊奶 6000美元 制剂的转基因羊 中国 中科院发育所 合作研究获得两头体细胞克隆 扬州大学 羊，分泌乳腺药物，近年来在 牛羊等动物上取得一系列成