硅胶柱的制备[精选].docVIP

硅胶的预处理 我们以浓盐酸浸泡硅胶14小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后，将起进行减压抽滤，后不断加蒸馏水冲洗。在1小时之后，抽滤的水呈中性，但仍然含有氯离子。经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子。晾干一周后，在110烘箱中活化2小时。 活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀。在装柱时，宜使用口径较大的玻璃漏斗置于 层析柱上部，注入1/2高的石油醚，打开下部活塞，然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗，这样可以防止层析柱中形成断层(这一步是实验的关键步骤)。 装柱 装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。 湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂走柱子，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。 干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂走柱子，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。干法装柱较方便，但最大的缺陷在于走柱子时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉，但是，一旦撤去压力，如在上样、加溶剂等操作的时候，气泡就会释放出来，严重时，整个柱子变花，样品不可能平整地通过，当然也就谈不上分离了。解决的办法是：第一、硅胶一定要天结实；第二、 一定要用较多的溶剂走柱子，一定要到柱子的下端不再发烫，恢复到室温后再撤去压力。 也有介绍在硅胶的最上层填上一小层石英砂，防止添加溶剂的时候，使得样品层不再整齐。但我的感觉是如果小心上样，添加溶剂，则没有这个必要。 上样也有干法和湿法之分：干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后，在加入少量硅胶，拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦，但可以保证样品层很平整。湿法上样就是用少量溶剂（最好就是展开剂，如果展开剂的溶解度不好，则可以用一极性较大的溶剂，但必须少量）将样品溶解后，再用胶头滴管转移得到的溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量 芗 洗涤后，再加入。湿法较方便，熟手一般采用此法 推荐一种将硅胶柱装得均匀又密实的方法---非常实用 硅胶柱装不好,主要出现的问题有疏密不均匀和不够密实,假如是比较大的柱,在溶剂进入硅胶柱后,极易造成硅胶柱体出现断裂,影响分离效果.解决办法是先在层析柱下面的溶液出口处接上真空泵连接管,开启真空泵,将预备好的硅胶倒入空层析柱中.硅胶倒入的速度不要太快,加完硅胶后要抖动柱子,以使顶部的硅胶形成平面,待硅胶不再向下收缩为止,[u]关掉层析柱出口处的阀或封闭真空泵连接管,在硅胶柱内气压平衡后,[/u]取掉真空管即可.也可以先把硅胶全部装入柱中再抽真空,但这样效果要差些.我一直采用此法装柱,效果很好.??谢谢!用在树脂柱上可以吗？??没有真空泵怎么办啊？呵呵我一般直接装，用洗耳球猛敲柱子，决对放心，不会敲破的。装填的效果也不错。还得要赞一下，LZ太牛B了，这样的方法也想出来，值得学习。佩服！? ???这样很好的，我一直就是这么装的，科学院系统都着样的??同“加压柱”类似??这样装柱是很方便，可是也会出现问题，就是“太实”了，可能导致流动相速度太慢（加相同压力比较）。我们实验室采取的方法是，先倒入需量的硅胶，然后在地面放本书，把柱子“掂”实，手法熟练的话，最终得到的柱子表面中间一点儿突起，边缘稍低，放平后，硅胶还能保持那种状态。当然，这个也看硅胶本身质量的，我也碰到过怎么都“掂”不实的，就借助减压泵抽一下（前提是先把硅胶“掂”平），但不会抽到柱子高度降到最低，那样影响流速，也会影响洗脱效果。? 我建议从以下几个方向考虑对分离度产生的影响1，是大硅胶柱还是小硅胶柱，长柱还是短柱，粗分还是细分 2，多少目的硅胶3，上样量的大小，4，干法上样还是湿法上样5，干法装柱还是湿法装柱6，用什么洗脱系统洗脱，7，拌样量的大小 我先就第一点稍微说一下，抛砖引玉，后面的人可以就其它点说一说，也可以提出不同意见，都予以重奖。天然产物分离，首先考虑的是样品量也就是浸膏的多少，直接决定了你用大柱还是小柱，大柱用来粗分，小柱用来细分，大柱和小柱没有绝对的区别，一般认为500克装柱量的硅胶柱可以认为是大柱，100－500可的装柱量可以认为是中柱，50可以下可以认为是小柱500克以上大柱一般用来粗分