【2017年整理】我们实验室用的银染方法.docVIP

我们实验室用的银染方法 1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次) 2.10%甲醇浸泡10分钟 3.水漂洗3次,每次数秒 4.2μM??DTT溶液浸泡20分钟 5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟 6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML) 7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML) 8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML) 9.10G柠檬酸定影 显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀 水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏 此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看 一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。固定、银染之后均需充分的漂洗。 其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净 大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表