李蒙牛奶中抗生素的来源及定量方法摘要.pptVIP

牛奶中抗生素的来源及定量分析方法 姓名：李蒙 学号：2151274 目录 一、抗生素的定义和种类 二、分析牛奶中抗生素的可能来源 三、实验部分 一、抗生素的定义 是指某些细菌、放线菌、真菌等微生物的次级代谢产物，能杀灭或抑制病原微生物，有些抗生素还具有抗肿瘤和抗寄生虫作用。 一、抗生素的种类 抗生素的种类在世界范围内的食品或农产品进出口贸易中，主要有6类需要检测的残留抗生素，分别为β- 内酰胺类、四环素类、磺胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、氯霉素类。 二、牛奶中抗生素的可能来源 1.治疗药物 治疗泌乳期病牛时使用的抗生素可能会从奶牛体内移行到乳腺，进入牛奶中。 二、牛奶中抗生素的可能来源 2.饲料添加剂 为了预防奶牛疾病并提高产量，在奶牛饲料中添加抗生素也可能会造成牛奶中抗生素的残留。 二、牛奶中抗生素的可能来源 3.其他渠道 由于牧场没有严格的卫生制度和配套的设施，加之管理不善，在实施挤奶、储奶时，可能也会造成牛奶抗生素的污染。 三、实验 样品取样地点：某奶牛场样品保存条件：4℃条件下密封保 存，避免阳光直射 样品收集 1.选取20头患有乳房炎的奶牛，对其中10头患病奶牛，采用无抗药品进行治疗，另外10头患病奶牛采用含抗生素的药品进行治疗，用药8～12h后分别对奶牛进行采样（100mL），标注保存，待测。 样品收集 2.选取10头健康的奶牛，饲喂含有抗生素添加剂的饲料，饲喂 8 ～ 12 h后分别对奶牛进行采样（100mL），标注保存，待测。 样品收集 3.选取10头健康的奶牛，饲喂无添加剂的饲料， 8 ～ 12 h后分别对奶牛进行采样（100mL），标注保存，待检。 四环素类抗生素与氯霉素类抗生素的检测方法 ——固相萃取-高效液相色谱法（SPE-HPLC） 仪器 Agilent1200 型高效液相色谱仪（美国 Agilent 公司） Diamonsil 钻石 C18柱（4.6mm×250mm，5μm）（北京迪马科技有限公司） Cary 100 Bio 紫外可见分光光度计（美国 Varian 公司） HYPERSEP C18固相萃取柱（美国 Thermo 公司） Waters Oasis HLB 固相萃取柱（美国 Waters 公司） EYELAOSB-2000 旋转仪蒸发仪（日本 EYELA 公司） AL204 电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司） H66MC 超声波发生器（无锡市超声电子设备厂） SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司） 80-2 型离心机（上海医疗器械集团） 试剂 乙腈（色谱纯） 正己烷（色谱纯） 甲醇（色谱纯） 甲酸（色谱纯） 盐酸四环素（OTC） 盐酸土霉素（TC） 盐酸金霉素（CTC） 氯霉素（CP） 磷酸氢二钾（分析纯） 柠檬酸（分析纯） 乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na）（分析纯） 试剂 0.1mol EDTA-2Na-Mcllvaine 缓冲溶液： 称取柠檬酸 12.9g，磷酸氢二钾10.9g，EDTA-2Na 37.2g，用高纯水溶解并定容至1.0L，调节pH值至4.0±0.5。 样品的处理 各准确量取上述牛奶样品2.00mL，并加入2mL水，加入2mLEDTA-2Na-Mcllvaine 缓冲溶液充分振荡2min后，4000r/min 离心10min，残渣按照上法再次提取，合并两次上清液后加入等体积正己烷萃取，过 Waters Oasis HLB 固相萃取柱（预先用 3.0mL甲醇和 3.0mL纯净水活化），等近干时用1.0mL体积分数为0.1%的甲酸乙腈溶液洗脱，收集洗脱液。洗脱液经0.45μm有机滤膜过滤后用于 HPLC分析。 色谱条件 色谱柱：Diamonsil钻石 C18柱（4.6mm×250mm，5μm） 流动相为 0.1%甲酸水溶液-乙腈 流速：1.0mL/min 进样量：10.0 μL 柱温：30oC 检测波长：270nm 结果计算 样品中抗生素残留量Cn按下式计算： Cn=An/Ab×Cb×V/G n：表示各类抗生素 An：表示各类抗生素的峰面积 Ab：表示各类抗生素标准品的峰面积 Cb：表示各类抗生素标准品的浓度（μg/mL） V：表示样品定容体积（mL） Cn：表示样品中各类抗生素的残留量（mg/kg） G：表示样品的称样量（g） 试剂 青霉素 G 标准对照品 阿莫西林标准对照品 甲醇（色谱纯） 乙腈（色谱纯） 磷酸二氢钾（分析纯） 实验所用水均为超纯水 样品的处理 各准确称取上述牛奶样品30mL，置于100mL聚丙烯离心管中，加入10.0mL乙腈溶液提取，摇匀后，再加入 50.0mL乙腈溶液，充分摇