【2017年整理】生物显微技术讲义.doc

PAGE PAGE 32生物显微技术讲义唐山师范学院生命科学系陈超 石洪凌2005.3前言生物显微技术是高等院校生物系各专业的基础课,包含生物材料固定技术、生物染色技术、各种显微切片制作技术、显微化学技术显微摄影技术。通过这门课的学习，希望能够帮助大家加强生物实验的技能。使学生掌握制作动、植物显微切片的技术,掌握使用光学显微镜及进行显微摄影所必备的基本理论、基本知识和基本技术。本《生物显微技术大实验》是为了配合这门课的教学，在参考了国内一些相关教材的基础上，结合本教研室的历年实验经验与心得而编写的，仅供唐山师范学院生命科学系学生使用。生物显微技术的内容在其他教材中叙述比较零乱，没有统一的整体性。本指导在结合我系教学安排和实验的前提下，有针对性的安排了生物显微技术的理论教授和实验指导。内容主要包括石蜡切片的制作、显微摄影知识、数码显微镜及软件的使用。 由于编者业务水平和工作经验所限，虽然做了大量努力，书中难免还会存在缺点和不足。为此切盼广大师生在使用本书过程中能提出批评和建议，以备在以后的日子里改进和提高。 编者2005年1月于唐山师范学院目录第一章生物制片…………………………………………………..4 第一节前期准备………………………………………………..4 第二节生物制片分类…………………………………………..8 第三节石蜡切片 ……………………………………………..10第二章显微摄影技术…………………………………………37第三章暗室技术…………………………………………………48 第一节感光材料…………………………48 附 彩色显微摄影和黑白显微摄影的相关知识……………53第二节暗房工艺…………………………………………………57第四章数码显微摄影……………………………………………64实验一 徒手切片与整体制片法………. ……………………..66实验二 1、石蜡切片技术—固定、染色、返蓝………………702、石蜡切片技术—脱水、透明、浸蜡、包埋………..72 3、石蜡切片技术—切片、粘片、脱蜡、透明、封藏 74实验三 显微摄影及暗室技术…………………………………78实验四 数码显微摄影及研究分析软件的使用 …………………88实验五 所作切片的观察照相、提交作业 ………………………99第一章 生物制片第一节 前期准备一、玻璃器皿的清洗：（一）生物学实验使用的玻璃器皿及玻片均要清洗干净, 应以壁面被水均匀润湿而无水珠为标准。表1-1一般器皿的洗涤方法玻璃器皿可选用洗涤液及洗涤方法新购置未用过的器皿一般使用过的器皿沾有不溶物或刷洗不易达到的器皿沾有较多凡士林或其他油污的器皿沾有油脂物质的器皿洗衣粉、洗涤剂煮洗，或重铬酸钾洗液浸洗30分钟洗衣粉、洗涤剂刷洗重铬酸钾洗液浸泡先用二甲苯或汽油擦洗，再用浓碱或热洗涤剂刷洗热洗涤剂，或30~40%的碱液 玻璃器皿经洗涤液清洗后→自来水冲洗→蒸馏水冲洗→倒放于大张滤纸上晾干或玻璃仪器烘干器烘干。（二）洗液配法：重铬酸钾 20g 浓硫酸 100ml 清水 100ml先将重铬酸钾溶于水中，在一滴滴加入浓硫酸，边加边搅拌，颜色为红褐色放于玻璃容器内可反复使用，一直到颜色变为蓝黑色为止。（三）新旧载玻片及盖玻片的清洗：1．新的：2%盐酸酒精（95%酒精100份加浓盐酸2份）浸泡几个小时→流水冲洗干净→95%酒精中待用。2.旧的：没用树胶封片的：洗衣粉煮沸5-10分钟→清水冲洗→洗液30分钟→流水冲洗→蒸馏水洗净→95%酒精中待用。3.树胶封片的玻片：二甲苯浸泡、洗净→95%酒精中待用。二、溶液的配制：（一）百分比浓度 :质量百分比浓度。即100g溶液中所含溶质的克数。1.稀溶液的配置：例1：1%的番红水溶液—即将番红1克溶解于100 ml的蒸馏水中。例2：0.1%固绿酒精溶液—即将固绿0.1克溶解于100ml的95%酒精中。2.浓溶液的配置：配置高浓度的溶液，应在100ml的水中减去溶质重量的水。例：15%NaCL称取15gNaCL,溶于85ml水中。（二）摩尔浓度：1升溶液中所含溶质的mol数。用M表示。例：配制500ml 2M NaCO3溶液 称取2×106×0.5=106g NaCO3溶于500ml水中。（三）当量浓度：1升溶液中所含溶质的克当量数。用N表示。当量（E）与分子量（MW）的关系：E=MW/n其中酸的n为酸分子中可被金属取代的氢原子数碱的n为碱分子中金属的原子价盐类的n为盐分子中金属的原子数乘金属的原子价如：HNO3的当量=63/1=63 H2SO4的当量=98/2=49Ca(OH)2的当量=74/2=37Al2(SO4)3的当量=342/2*3=57一般溶液的配制