(茶多酚.docVIP

方法一：酒石酸亚铁法测定茶多酚 1.适用范围：茶叶、茶粉及其制品，茶饮料等。 2.原理： 在茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚性化合物，均称茶多酚。茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，可用分光光度法测定其含量。 3.试剂： 所用试剂应为分析纯，水为蒸馏水或去离子水。 3.1酒石酸亚铁溶液：称取1g（准确至0.0001）硫酸亚铁，5g酒石酸钾钠（准确至0.0001），用水溶解并定容至1L（低温保存，有效期10天）。 3.2 pH7.5磷酸缓冲溶液： 3.2.1 1/15磷酸氢二钠：称取23.87g十二水磷酸氢二钠，加水溶解后定容至1L。 3.2.2 1/15磷酸二氢钾：称取磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。取上述1/15的磷酸氢二钠溶液85ml和1/15的磷酸二氢钾15ml混合均匀 4.仪器及用具： 4.1分光光度计 4.2磨碎机：由不吸收水分的材料制成；死角尽可能小，易于清扫；使磨碎样品能完全通过孔径um的筛子。.3 胖肚移液管：5ml，20ml。本实验进行过程不得使用移液枪，以降低检测误差。 4.4密度计，精确到0.001g/ml 4.5电热恒温水浴锅 5.操作步骤： 5.1茶叶： 5.1.1试样的制备：（紧压茶以外的各类茶）先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分使磨碎样品能完全通过孔径um的筛子。如果水分含量太高，不能磨到的细度，必须将样品预先干燥（烘箱不超过100为宜）。待试样冷却后（置干燥器内），再进行磨碎。 5.1.2试液的制备：（1）称取3g（精确至0.001g）磨碎试样于500ml锥形瓶中。 （2）加沸蒸馏水450ml，立即移入沸水浴中锥形瓶，浸提45min。若水浴无振动装置则每隔10min摇动一次。 （3）浸提完毕后，冷却至10~30℃（冷却时间控制在30min以内）将样液转移到500ml容量瓶内，并定容至刻度。 （4）定容后立即常压过滤，弃去初滤液（5ml以上），收集滤液。（所用滤纸为杭州新华纸业有限公司，双圈牌，定量，慢速滤纸）。 5.2茶粉：茶粉试液的制备：称取1g的样品（精确至0.0001g），沸蒸馏水0ml充分溶解，定容至500ml。5.3茶饮料、茶汁：5.3.1测定密度ρ：将样品充分摇匀后，测定其相对密度ρ，单位g/ml。 5.3.2较透明的样液，如果味茶饮料：将样液充分摇匀后备用。 5.3.较浑浊的样液，如果汁茶饮料：称取充分混匀的样液25ml于50ml容量瓶中，加入95%乙醇（C2H2OH）15ml，充分摇匀，放置15min后，用水定容至刻度。用慢速定量滤纸过滤，滤液备用。 5.3.含碳酸气的样液：量取充分混匀的样液100ml于250ml烧杯中，称取其总质量，然后置于电炉上加热至沸腾，在微沸状态下加热10min，将二氧化碳气排除。冷却后，用水补足原来的质量。摇匀后，备用。5.4测定： 5.4.1用20ml移液管精确量取20ml待测样品至100ml定量瓶中，加入蒸馏水（或RO水）稀释定容至100ml，充分振荡混匀。 5.4.2l取5ml稀释液于25ml容量瓶内。 5.4.3 加酒石酸亚铁溶液5ml，充分混合，再加pH7.5缓冲液至刻度，摇匀。 5.4.4用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A1）。（试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+5ml酒石酸亚铁溶液+磷酸缓冲液定容至25ml） 5.4.5同时移取等量的试液于25ml容量瓶中，用pH7.5磷酸缓冲液定容至刻度，测定其吸光度（A2）。 （试剂空白溶液为：5ml蒸馏水（或RO）水+磷酸缓冲液定容至25ml） 6.结果计算： 6.1茶叶中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算： 茶多酚（%）=××100 式中：A1—试液显色后的吸光度； L1—试液的总量，本方法中为500，ml ； L2—测定时的用液量，本方法中为1， ml ； M—试样的质量，g； m—试样干物质含量百分率，%； 1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。6.2茶粉中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算： 茶多酚（%）=××100 式中：A1—试液显色后的吸光度；A2—试液底色的吸光度； L1—试液的总量，本方法中为500，ml ； L2—测定时的用液量，本方法中为1， ml ； M—试样的质量，g； m—试样干物质含量百分率，%； 1.957—用1cm比色杯，当吸光度等于0.5时，每毫升茶汤中含茶多酚相当于1.957mg。 6.3饮料中茶多酚含量按下式计算： 茶多酚（mg/kg）=×1000 式中：A1—试液显色后的吸光度； A2—试液底色的吸光度； K—稀释倍数，本方法中为1； L—测定时吸取试液的体积，本方法