【2017年整理】PCR扩增失败的原因分析.docxVIP

PCR扩增失败的原因分析?? 2010-12-13 16:48:31|??分类：? HYPERLINK /blog/ \l m=0t=1c=fks_083071080084089074080095074071087083080074092085087 \o 默认分类 默认分类|字号?订阅 PCR扩增失败原因分析，PCR产物电泳2010-05-15 16:07 一 模板质量问题： ???? 1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑个电泳看看提取的DNA，PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题，可以增加模板量试试，但不一定行得通。2）模板里面残留某种试剂成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是这种情况，可以用试剂盒把模板再纯化一下，或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量。?? 3） 为什么跑电泳会出现拖带呢？ ?????? 1. 有可能的因为你的电压调的太高了。电泳跟很多因素有关，其中就有一个是电压，在适当的电压范围内增加是可以加快迁移速率，但是要是超到一个临界值反而有害。你可以适当的调低点看看。 ????? 2.有时候发现上样量太多的话会有拖带。你看能否回收之后 ，按1:50 或1:100 等稀释后，再当成模板扩一次怎么样。 二 引物问题 ??? 1）样品自身的基因型差异导致扩增失败。也就是说你的引物与某些基因型的样品结合的好，而和