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分子生物学 2016-6-21周二 8：30 南5 第一章?基因表达调控miRNA?，siRAN?，cDNA?，反式作用因子，顺式作用因子，绝缘子，操纵子，核小体，管家基因，乳酸操纵子调控，原核和真核生物基因表达调控不同。第二章 细胞周期，干细胞发育，抑癌基因，p53基因。第三章?基因工程?基因文库，质粒特点，质粒的构象，限制性内切酶特点，基因工程载体条件，基因工程的过程，获取目的基因的方法，PCR过程。第五章?分子杂交分子杂交，探针，northern?,southern,?western.第六章??基因诊断与基因治疗基因诊断对象，基因诊断技术，基因治疗过程，SNP(单核苷酸多态性),?RFLP(限制性酶切长度多态)。 参考资料? 第一章 基因表达调控 操纵子（operon） 操纵子是原核生物基因表达和调控的基本单元，由编码功能相关蛋白的多个结构基因和共同的调控序列组成 管家基因（housekeeping gene）： 某些基因产物对生命全过程都是必需的或必不可少，且较少受环境因素的影响 SiRNA：将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默，这种转录后基因沉默机制被称为RNA干扰(RNAi)。参与RNAi过程的双链小分子RNA称为小干扰RNA(siRNA) 核小体：（染色体的基本组成单位）由DNA和5种组蛋白共同构成的。各两分子的H2A,?H2B,?H3和?H4组成一个八聚体的组蛋白核心，长度约146bp的DNA在组蛋白核心上盘绕1.75圈。组蛋白核心和其上的DNA形成核小体的核心颗粒。核心颗粒之间再由组蛋白H1和连接DNA构成的连接区连接形成串珠样结构。 绝缘子： 是一组在真核生物基因组中建立独立转录活性区的调控元件，具有两种性质，一，当绝缘子位于增强子或者沉默子与启动子之间时可以阻断增强子对启动子的作用。二，绝缘子可以使其界定的基因表达不受位置效应的影响。(如在转基因时，目的基因整合到染色体上的不同位置，因位置效应作用基因的表达水平差异很大。但是如果在目的基因的两侧连接上绝缘子，目的基因往往不受染色体位置效应的影响) 微小RNA（miRNA）:长约22nt的非编码RNA，广泛存在于从病毒到人类的各种生物中。这些小RNA能够与靶mRNA结合后，通过降解靶mRNA或阻断其蛋白合成而调控基因表达 cDNA:以mRNA为模板,利用逆转录酶合成与mRNA互补的DNA即为cDNA 顺式作用元件（cis-acting element）:同一DNA分子上具有可影响或调控转录的各种片断 1、核心启动子成分:如TATA框（转录因子与DNA结合部位） 2、上游启动子成分:如CAAT框与GC框（影响转录起始的频率）、八聚体（ATF结合位点） 3、远上游元件：增强子、减弱子 4、特殊启动子成分和反应性元件 反式作用因子（trans-acting factor）:能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA或RNA聚合酶的蛋白质 1、通用反式作用因子 2、特殊组织与细胞中的反式作用因子 3、和反应性元件相结合的反式作用因子 反式作用因子通过以下三个途径发挥作用 1、蛋白质直接和DNA结合(螺旋转角螺旋、锌指结构、亮氨酸拉链、碱性螺旋-环-螺旋、同源异型结构域) 2、蛋白质与配体结合 3、蛋白质与其他蛋白质的结合及其修饰 乳糖操纵子调控:（结构见于生化P366） 负性调控:无乳糖，由lac I基因所编码的阻遏蛋白与lac O序列（操纵序列）结合，转录抑制 有乳糖，由lac I基因所编码的阻遏蛋白与乳糖结合，转录激活 正性调控:有葡萄糖，cAMP浓度高，与cAMP受体蛋白结合形成CAP，CAP与CAP结合位点结合，转录激活 无葡萄糖，cAMP浓度低，不能形成CAP，转录受抑制 因此，只有在有乳糖且无葡萄糖的条件下，转录才能激活 真核生物与原核生物基因表达调控的区别（课本P13、14） 结构不同：分子水平（DNA含量及组成差异）、细胞水平（单/多顺反子，单/二倍体，） 2、功能不同：瞬时调控或可逆性调控；发育调控或不可逆性调控 真核生物基因表达调控的特点: 1、单顺反子编码基因;原核生物常为多顺反子结构 2、DNA与组蛋白和非组蛋白结合;原核生物DNA裸露 3、断裂基因 4、DNA重排和基因拷贝数变化 5、转录调节区域较大 6、多层次调控（经成熟和剪切等过程后，才能被顺利翻译成蛋白质） 7、核膜的空间间隔（核内转录核外翻译）;原核生物边转录边翻译 第二章 细胞周期 1.细胞周期的定义 上一次有丝分裂结束到下一次有丝分裂的结束，亲代细胞有一个分裂为