粗多糖（碱性酒石酸铜滴定法）..docVIP

QB/XXXX-2005 粗多糖的测定方法 （一）碱性酒石酸铜滴定法 本方法适用于保健食品中粗多糖的测定。 1.方法提要 样品多糖沉淀物经酸解后，全部转成单糖，单糖具还原性，在加热条件下直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以亚甲蓝作指示剂，根据样品液消耗的体积计算还原糖含量，再乘以换算系数0.9计算多糖含量。 2.仪器 （1）离心机：4000r/min。 （2）离心瓶容量100mL或具盖10mL离心管。 （3）水解瓶：500mL带冷凝回流装置。 （4）电炉：1000W。 （5）pH计。 （6）水浴锅。 3.试剂 实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。 （1）碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4?5H2O）15g，亚甲蓝（次甲基蓝）0.05g，加水溶解，并稀释至1000mL。 （2）碱性酒石酸铜乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL储存于橡胶塞玻璃瓶内。 （3）无水乙醇。 （4）浓盐酸。 （5）40%氢氧化钠。 （6）葡萄糖标准液：准确称取1.0000g经过98~100℃干燥至恒重的分析纯葡萄糖，加水溶解后，并以水稀释至1000mL此溶液1mL含1mg葡萄糖，现用现配。 4.测定步骤 （1）样品处理： a.胶囊、片剂、粉剂、颗粒等（不含淀粉）的样品：准确称取均匀研碎的样品粉末3~5g，置于100mL的离心瓶中，加15mL热水（温度90℃）搅拌直至溶解无沉淀物为止，如样品难溶，可在沸水浴中加热30min后过滤，定容。取此待测液15mL加75mL无水乙醇搅拌均匀（若只有10mL离心管，则每管加入1.5mL样品溶液，后加7.5mL无水乙醇，加盖反复倾倒管子数次）。在离心机中以4000r/min离心10min，并小心弃去上清液，再加15mL热水（温度90℃）冲洗离心瓶中沉淀物，或用1.5mL热水冲洗离心管中沉淀物，重复一次后再以4000r/min离心10min，小心地用吸管将上层液体吸去。 用玻璃棒或小羹匙将沉淀物取出并转移至500mL酸水解瓶底部，取50mL热水（温度90℃），其中部分用来冲洗离心瓶或离心管壁中剩余的沉淀物，将沉淀物一并转移至500mL酸水解瓶中，加入15mL浓盐酸于酸水解瓶中，开启冷凝水，在沸水浴中加热2h，冷却，然后先用40%的氢氧化钠粗调，后用稀的氢氧化钠细调，再置于pH计上调整pH在6.8~7.2之间，（不要用pH纸调试）。 将已中和的酸解液转移至100~250mL容量瓶中（视糖浓度而定），加水定容（V1）。用滤纸过滤，滤液为待测液。 b.口服液样品：准确吸取均匀样品溶液15mL于100mL的离心瓶中，或1.5mL于10mL离心管中，同上操作。 c.胶囊、片剂、粉剂、颗粒等（含淀粉）的样品：准确称取2g均匀研碎的样品粉末，置于100mL的具塞锥形瓶中，加50mL热水（90℃）溶解，在沸水浴中加热15min，使淀粉糊化，冷却至60℃以下。加1.0mL10%的淀粉酶溶液，加0.5mL乙酸钠缓冲液（pH7.4），加塞，于55~60℃保温1h，中间间歇搅拌（取1滴上清液用碘液检验是否完全水解。若呈蓝色，再加淀粉酶溶液并继续保温，直至酶解液加碘液后不呈蓝色为止），加热至沸（使酶失活），然后再加入1%的葡萄糖酶在37℃温箱中，保温24h使淀粉全部酶解成葡萄糖。再移样液于蒸发皿中，并在沸水浴中稍浓缩，放冷，小心将样液转入25mL容量瓶中，用水洗容器，并定容至刻度，过滤。 然后按上法用无水乙醇沉淀多糖，并用85%的乙醇洗沉淀物2次，将沉淀物酸解中和、定容后待测。 （2）标定碱性酒石酸铜液： a.用定量移液管吸取碱性酒石酸铜甲、乙液各5mL于150mL的锥形瓶中，加10mL蒸馏水及数粒玻璃珠。 b.用滴定管加入9.0mL标准葡萄糖溶液于锥形瓶中，并将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2min内至沸，并保持溶液在微沸的状态下再用标准葡萄糖溶液滴定，待溶液颜色变浅时，以每2s1滴的速度滴至蓝色刚退去为终点，记录消耗标准葡萄糖溶液的体积，同时平行操作3次，取其平均值（VG）。 （3）样品溶液的预测： a.按4（2）a操作。 b.将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2min内至沸，并保持溶液在微沸的状态下，从滴定管中滴加样品溶液，待溶液颜色变浅时，以2s1滴的速度滴至蓝色刚退去为终点，记录样液消耗体积即为预测体积。 （4）样品测定： a.按4（2）a操作。 b.从滴定管中滴加比预测体积少1.0mL的样品溶液，将锥形瓶置电炉上迅速加热，务必在2min内至沸，并保持溶液在微沸的状态下，从滴定管中滴加样品溶液，待溶液颜色变浅时，以2s1滴的速度滴至蓝色刚退去为终点，记录样液消耗的总体积，同时平行操作3次，取其平均值（V2）。 5.结果计算 VG×c×V1 样品中粗多糖的