第八章 外工源化合物致癌作用.pptVIP

基本方法 定量构效关系分析：特定结构、空间构象—生物学效应 （生物信息学） 短期试验—快速筛查 致突变试验 、细胞转化试验 、哺乳动物短期致癌试验 哺乳动物长期致癌试验 人群流行病学调查 一、短期试验 （一）致突变试验： ①基因突变试验：Ames试验... ②染色体畸变试验：体外细胞系细胞遗传学分析，小鼠骨 髓微核试验，大鼠骨髓染色体畸变试验; ③原发性DNA损伤：DNA加合物，链断裂，DNA修复诱导(细菌SOS反应，大鼠肝UDS诱导)，SCE试验； ④体外细胞转化：叙利亚地鼠胚胎细胞，Balb/c 3T3细胞 （二）细胞转化试验 受试物与正常细胞在体外接触，如有致癌作用，可使正常细胞形态、功能发生变化，发生与癌细胞相似的过程 恶性转化后的细胞接种在裸鼠皮下可形成肉眼可见的肿瘤 可以弥补致突变试验的不足：可检测遗传毒和非遗传毒致癌物 （三）哺乳动物短期致癌试验 哺乳动物短期致癌试验又称为有限体内试验，指时间有限(数月)，靶器官有限。较受重视的短期致癌试验有下列四种： 1．小鼠皮肤肿瘤诱发试验： 引发剂为致癌性多环芳烃，促长剂为佛波醇酯(TPA)。 2．小鼠肺瘤诱发试验： 引发剂为乌拉坦，促长剂为二丁基经基甲苯(BHT)。 3．大鼠肝转化灶诱发试验: 引发剂为二乙基亚硝胺(DEN)，促长剂为苯巴比妥(PB) 4．雌性大鼠乳腺癌诱发试验 此四个试验不是成组试验，应根据受试物的特点选择使用。此四个试验任一试验得到阳性结果的意义与长期动物致癌试验相似，但阴性结果并不能排除受试物的致癌性。 适用于按照构效关系能预测靶器官的受试物 何时应考虑进行致癌性评价： ①人体可能长期暴露于该化学物； ②该化学物或其代谢物的化学结构与已知致癌物相似； ③反复染毒毒性试验提示该化学物可能产生癌前病变。 如在3种遗传毒理学短期试验均得到阳性结果，可预测为遗传毒性致癌物；如在3种遗传毒理学短期试验均得到阴性结果，可预测为非遗传毒性非致癌物；如经5种遗传毒理学短期试验仍不能预测其致癌性的化学品，应优先进行哺乳动物致癌试验。 二、哺乳动物长期致癌试验 期限： 长期或终生 大鼠－2年 小鼠－1.5年 动物： 敏感动物（两种） 刚断乳或断乳不久 雌雄各半 每组每性别50只，希望在第1个肿瘤出现时，每组还有不少于25只动物 剂量： 3个染毒组 无作用剂量组 阈剂量组 发生肿瘤剂量组 1个对照组 1个溶剂组（必要时） 结果观察、分析与评定 肿瘤总发生率(％)＝(实验结束时患肿瘤动物总数/有效动物总数)×100％ 有效动物总数指最早发现肿瘤时存活动物总数 致癌试验常用指标： 1.肿瘤发生率：最重要指标 2.多发性：一个动物出现多个肿瘤或一个器官出现多个肿瘤 3.潜伏期：通常用各组第一个肿瘤出现时间为该组潜伏期 肿瘤总发生率、恶性肿瘤总发生率、各器官或组织肿瘤发生率和恶性肿瘤发生率，各病理类型肿瘤发生率… 应着重报告发现肿瘤的部位、数量、性质、癌前病变，以及其他毒性效应； 应报告剂量—反应关系及统计学分析结果。同时重视染毒组出现而对照组未出现的肿瘤类型 如在动物组织中观察到良性和恶性肿瘤，并有良性肿瘤向恶性化进展的证据，在进行统计学分析之前将良性和恶性肿瘤合并是适宜的，但仍希望分别对良性和恶性分别统计处理。 评价该试验不同剂量良性和恶性肿瘤的相对数量可有助于确定该受试动物对受试物的剂量反应关系。另一方面，如果仅观察到良性肿瘤，并无恶性化进展的证据，则将此受试物认为是致癌物是不适宜的，此仅提示在该试验条件下需要进一步研究。 结果报告： 三、人群流行病学调查 （一）接触标记 （二）生物效应标记 （三）敏感性标记 确定人类致癌物的唯一方法 观察指标多是化学致癌作用的结果，对三早及预防不利 1．转癌基因小鼠 与转录启动子连接的癌基因转入后可直接在某些特定的组织中高效表达，使该组织细胞处于引发状态，这类转基因动物是研究化学物致癌作用的敏感体系。携带癌基因的转基因动物可用于致癌试验，试验周期仅3个月左右，有希望发展成代替长期动物致癌试验的试验系统。这些携带有癌基因的转基因动物，可用来研究外源化学物与肿瘤相关基因的作用及外源化学物在致癌不同阶段中的作用机制。以各种组织特异性的促长剂处理转入不同癌基因的小鼠，可为致癌过程的研究提供新线索。 四、转基因小鼠在致癌作用的研究 2．肿瘤抑制基因敲除小鼠 在P53-/-小鼠，肿瘤(特别是淋巴肉瘤)的发生比正常小鼠(P53+/+)增加而且提前。由于P53-/-小鼠的肿瘤发生具有组织特异性，进一步研究这些肿瘤的遗传学基础有助于鉴定P53基因的功能。而杂合子小鼠(P53+/-)在出