DNA转录要点.pptVIP

真核细胞的RNA聚合酶 真核细胞的RNA聚合酶出现了功能分工，不同性质的RNA由不同的RNA聚合酶催化转录，其细胞核具有三种RNA聚合酶，即RNA聚合酶I、II、和III，三者也分别被称为RNA聚合酶A、B和C，它们分别催化细胞核内的rRNA（5S rRNA除外）、mRNA和小分子RNA（tRNA和5SrRNA）的转录。除此以外，线粒体和叶绿体也含有RNA聚合酶。 羧基端结构域——CTD 所有的真核细胞RNA聚合酶II最大亚基的CTD都含有一段由7个氨基酸残基组成的高度保守的重复序列，其一致序列是富含羟基氨基酸的YSTPSPS，因此能够被磷酸化修饰。在酵母细胞，该序列重复了26次，哺乳动物则重复56次。该重复序列是RNA聚合酶II的活性所必需的。缺失突变实验表明，酵母的CTD至少需要13段重复序列它才能保证酵母细胞能够生存。其它研究还表明，CTD没被磷酸化的RNA聚合酶II参与转录的起始，CTD被磷酸化以后，转录才从起始阶段进入延伸阶段，而且磷酸化的CTD对于转录的后加工（带帽和加尾）也是必需的。 转录的延伸 一旦σ因子释放，转录就进入延伸。失去σ因子的核心酶通过松散的“滑动钳”构象握住DNA，以更快的速度沿着模板链向前推进。转录泡则随着核心酶的移动而移动，其大小维持在17 bp左右。转录泡的维持不仅需要聚合酶在转录泡前面解链以使新的模板链序列得以暴露，而且还要允许转录泡后面的DNA重新形成双链。解链形成的超螺旋可被结合在转录泡前面的拓扑异构酶解除。由于转录的方向始终是从5′→3′，新参入的核苷酸总是被添加在RNA链的3′-OH端。每参入一个新的核苷酸，RNA-DNA杂交双链必须发生旋转。 在延伸阶段，RNA链3′-端大约有9 bp长的片段与模板链形成A型杂交双螺旋。延伸的平均速度在37oC下约为50nt/秒。但是，延伸速度并不是恒定的，已发现很多基因当转录到某些位置的时候，如富含GC碱基对的区域，聚合酶的移动速度趋缓，甚至发生暂停。有时，互补的NTP暂时短缺也可导致RNA聚合酶的暂停。如果发生这种情形，重新启动RNA合成需要内源核酸酶—GreA和GreB来解除暂停状态：先是RNA聚合酶倒退，然后，GreA和GreB切除 3′-端几个核苷酸，以便让RNA的3′-OH能重新回到活性中心。 RNA聚合酶II所负责的基因转录 催化mRNA、具有帽子结构的snRNA和某些病毒RNA的基因转录。 mRNA的基因转录受到多种顺式作用元件的控制，包括核心启动子、调控元件、增强子和沉默子。 核心启动子又名基础启动子，其功能与原核生物的启动子相当，负责招募和定位聚合酶II到转录起始点，以正确地起动基因的转录，也可能通过促进转录复合物的装配或稳定转录因子的结合而提高转录的效率。 核心启动子包括：TATA盒、起始子（Inr）、TFIIB识别元件（BRE）、下游启动子元件（DPE）和GC盒。 调控元件所起的作用是调节基因的转录效率，包括上游临近元件（UPE）和上游诱导元件（UIE），两者的作用都需要结合特殊的反式作用因子。 参与蛋白质基因转录的转录因子有两类，一类为基础转录因子或一般转录因子或普遍转录因子，另一类属于特异性转录因子。前者为所有的蛋白质基因表达所必需，后者为特定的基因表达所必需 转录的起始是各转录因子和RNA聚合酶II按照一定的次序，通过招募的方式形成PIC。转录因子和聚合酶II与启动子结合的前后次序可能是：TFIID→TFIIA→TFIIB→(TFIIF + RNAP II) →TFIIE→TFIIH。 转录终止于一段终止子区域，但终止子的性质以及它如何影响终止的尚不知晓 其他顺式作用元件 ERE——雌激素反应元件 HSE——热激元件 MRE——金属反应元件 GRE—— 糖皮质激素反应元件 CRE——cAMP反应元件 SRE——血清反应元件 RNA聚合酶I所负责的基因的转录 启动子 1) 核心启动子 (-45 to +20) 2) 上游控制元件 (UCE; -180 to -107) UCE和核心启动子之间的距离十分重要；具有物种特异性 转录因子 1) SL1: TBF+TAF 2) UBF 转录的起始、延伸 转录终止——需要一种特异性的DNA结合终止因子 UCE 核心启动子 转录起始点 RNA聚合酶III所负责的基因转录 该酶负责小分子RNA的转录，如tRNA、5S rRNA、7S RNA、snoRNA和无帽子结构的snRNA和某些病毒的mRNA等。 启动子分为两种类型：一类与RNA聚合酶II相似，也位于基因的上游；另一类为内部启动子，由于是基因内启动子，因此本身也被转录。 转录因子有TFIIIA、B和C。其中TFIIIC为组装因子，负责与A盒和B盒结合。TFIIIB是一种定位因