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分子诊断学复习题 一、概念 分子诊断学: 分子诊断学是以分子生物学理论为基础，利用基因和蛋白质分析技术和方法来研究人体内源性或外源性生物大分子体系的存在、结构或表达调控的变化，为疾病的监测、诊断、疗效判断和预后评估、个体化治疗等提供信息和决策依据的一门科学。 酶联免疫吸附测定（ELISA ）:是以抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记为基础，反应完成后加入酶反应底物，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。 时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）：是用镧系稀土元素螯合物标记抗体或抗原，检测标本中相应的抗原或抗体，用时间分辨荧光免疫分析检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。而时间分辨与酶免、放免相比，因为在激发光照射后，稀土元素激发光的最大吸收波与发射光的最大发射波长之间stokes位移最大；发光的半衰期长（10-2000us），避免了杂光的影响；激发光谱宽，发射光谱窄，不必担心光谱重叠。 金标免疫测定: 以微孔滤膜为载体，包被已知抗原或抗体，加入待检标本后，经滤膜的毛细管作用使标本中的抗体或抗原与膜上包被的抗原或抗体结合，再通过胶体金或超顺磁性纳米微粒结合物达到检测目的。 PCR-RFLP(限制性片段长度多态性): 聚合酶链式反应—限制性片段长度多态（PCR—RFLP）分析技术是在PCR技术基础上发展起来的。DNA碱基置换正好发生在某种限制性内切酶识别位点上，使酶切位点增加或者消失，利用这一酶切性质的改变，PCR特异扩增包含碱基置换的这段DNA，经某一限制酶切割，再利用琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，与正常比较来确定是否变异。应用PCR—RFLP，可检测某一致病基因已知的点突变，进行直接基因诊断，也可以此为遗传标记进行连锁分析进行间接基因诊断。DNA分子进行消化，得到的酶切片断其大小和数量可以在一定程度上反映出目的DNA分子的序列信息。 诊断遗传病和传染病病原体基因分型 PCR-SSCP(单链构象多态性): 聚合酶链反应-单链构象多态性分析是近年来发展起来的一种基因分析方法PCR-SSCP分析技术是一种DNA单链凝胶电泳技术，它根据形成不同构象的等长DNA单链在中性聚丙烯酰胺凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。DNA的迁移率不同，相同长度的DNA单链由于其碱基顺序不同而形成不同的构象，在电泳时表现出不同的迁移率。可以检测出突变位点的存在。 用于分析癌基因和等位基因的突变，检测遗传病、免疫性疾病、传染性疾病的基因突变。 Southern-blot: 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 Northern-blot:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 窗口期: 当机体被HIV感染后，抗体尚未产生这段时间即为窗口期（但机体内已有HIV存在，已具有传染性），但血清中可检测出P24抗原。 TORCH:TOX:Toxoplasma?gondii弓形虫;RV:Rubella virus风疹病毒;CMV:Human cytomegalovirus巨细胞病毒;HSV:Herpes simplex virus单纯疱疹病毒 基因芯片: 又称DNA芯片或DNA微阵列，将大量的基因片断有序地、高密度地排列在玻璃片或纤维膜等载体上，称之为基因芯片。 蛋白质芯片: 将各种蛋白质有序地固定于滴定板、滤膜和载玻片等各种载体上成为检测用的芯片，然后用荧光素标记蛋白质或其它成分与芯片作用，经漂洗后用荧光扫描仪或激光共聚焦扫描技术，测定芯片上各点的荧光强度，通过荧光强度分析蛋白质与蛋白质之间相互作用的关系，由此达到测定各种蛋白质功能的目的。 缩微芯片实验室:将生命科学领域中许多不连续的分析过程，如样品制备、核酸标记、生化反应、分离检测及数据处理等，通过采用半导体光刻加工等缩微技术，集成到一块生物芯片所形成的一种便携式生物化学分析系统。 乙肝病人“大三阳”: “HBsAg(+)，HBeAg(+)，HBcAb(+)”1、3、5，提示患者体内HBV-DNA呈活动性复制、传染性强，荧光定量PCR方法检测HBV-DNA阳性检出率大于95%。 乙肝病人“小三阳”: “HBsAg(+)，HBeAb(+)，HBcAb(+)”1、4、5 ，HBV-DNA阳