第十四章 工第二次课.pptVIP

回顾： PCR（ polymerase chain reaction ）: PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 （1）外源目标基因的分离、克隆以及目标基因的结构与功能研究。这一部分的工作是整个基因工程的基础，因此又称为基因工程的上游部分。 （2）适合转移、表达载体的构建或目标基因的表达调控结构重组。 （3）外源基因的导入。 （4）外源基因在宿主基因组上的整合、表达及检测与转基因生物的筛选。 （5）外源基因表达产物的生理功能的核实。 （6）转基因新品系的选育和建立，以及转基因新品系的效益分析。 （7）生态与进化安全保障机制的建立。 （8）消费安全评价。 20世纪80年代，转基因微生物发酵，药用多肽； 目前，转基因动物，人类活性多肽； 1990年，第一例腺苷脱氨酶缺陷患者治疗成功。 基因重组与基因工程： 蛋白质结构与功能（1） 蛋白质的生物学功能有哪些？ 蛋白质的基本结构单位是什么？有多少种？ 氨基酸是如何分类的？ 氨基酸的理化性质：两性解离、紫外吸收、茚三酮反应 概念：肽键 蛋白质结构与功能（2） 蛋白质一、二、三、四级结构的定义、维系稳定的化学键 蛋白质二级结构的形式、主要特点及影响因素 概念：肽平面、模体、结构域 蛋白质结构与功能（3） 核酸结构与功能 DNA与RNA在化学组成上的区别 DNA二级双螺旋结构的要点 酶（1） 酶的概念 酶的分子组成 名词：酶的活性中心、必需基团、同工酶 酶促反应的特点 思考为什么酶能更有效地降低反应的活化能？ 酶（2） 影响酶促反应速度的因素 米－曼氏方程式；曲线特点 Km的大小、意义、双倒数作图求Km 磺胺药抑菌的基本原理 可逆性抑制的类型及特点 酶（3） 酶的调节方式有哪些？ 酶分为几类？ 概念：变构调节、共价修饰调节、酶原的激活、酶活性 思考酶与医学的关系。 糖酵解代谢小结（1） 概念：在缺氧条件下，葡萄糖或糖原分解为乳酸的过程称为糖酵解。 反应部位：胞浆 三个关键酶催化三步不可逆反应 产能的方式和数量 方式：底物水平磷酸化 净生成ATP数量：从G开始 2×2-2 = 2ATP 从Gn开始 2×2-1= 3ATP 意义 缺氧时迅速提供能量；为红细胞及代谢活跃组织提供能量。 糖有氧氧化小结（2） 糖有氧氧化的概念 反应部位 三个阶段的关键酶 三羧酸循环的要点、意义 糖有氧氧化的意义及ATP的计算 1. 生物氧化的概念、生理意义。 2. 呼吸链的概念、组成成分；两条呼吸链的排列顺序。 3. 底物水平磷酸化、P/O的概念。 4. 氧化磷酸化的概念、偶联部位。 5. NADH两种穿梭途径。 1、嘌呤、嘧啶核苷酸从头合成的 原料、；分解产物； 2、脱氧核苷酸的生成。 小 结（2） 基因表达调控 小结（1） 1、基因表达调控的特点、方式和意义。 2、参与基因表达调控的基本因素 3、原核基因转录调节的特点（3个） 4、乳糖操纵子的结构及调控机制 5、概念：操纵子、顺式作用元件、反式作用因子 小 结（2） 1、真核基因组的结构特点 （庞大、单顺反子、重复序列、不连续性） 2、真核基因转录调控的特点 （3种RNApol、染色质变化、正性调节、转录与翻译分隔、修饰加工） 3、概念：单顺反子、增强子、miRNA、siRNA、RNA干涉 遗传病、恶性肿瘤、心脑血管病以及病毒 感染性疾病等疑难病的基因治疗方面进行 了大量实验研究。 如将固氮基因引入水稻，就不用再施氮肥 1. 产前诊断 2. 携带者测试 3. 症候前诊断 4. 遗传病易感性 （五）遗传疾病的预防 DNA的重组： 重组DNA技术： 重组DNA技术与医学的关系： 同源重组：最基本 细菌的重组：接合、转化、转导、 细胞融合 特异位点重组：整合酶 转座重组：插入序列、转座子 相关概念：工具酶、基因载体等 原理步骤： 分、切、接、转、筛（表） 目的基因的获取 重组体的连接筛选 克隆基因的表达 本 章 重 点： 基因重组，转化，转导，特异位点重组， 转座重组，基因工程，重组DNA，DNA克隆， 限制性核酸内切酶，基因载体 重组DNA技术的基本原理及操作步骤 获得目的基因的方法 外源基因与载体的连接方法 重组体的筛选方法 复 习 举例说明蛋白质结构与功能的关系。 简述蛋白质溶液维持稳定的因素。 引起蛋白质变性的因素有哪些?变性蛋白质有何变化？ 概念：蛋白质等电点、蛋白质变性