花生浓缩蛋白的制备及其特性研究实验..docVIP

第一章 绪论 第二章 花生浓缩蛋白的制备及其特性研究 2.1引言 2.2实验材料与试剂 （1）实验材料 脱脂花生蛋白粉 食品级市售 （2）主要试剂 本研究所用的常用生化试剂详见表2-1 表-1 常用生化试剂 药品名称 公司名称 无水乙醇（Ethanol）十二烷基磺酸钠（SDS） 三羟甲基氨基甲烷（Tris） β-巯基乙醇 （β-mercaptoethanol）N, N-亚甲基双丙烯酰胺（TEMED）硫酸铵 （mmonium persulfate）考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）romophenol blue） 冰醋酸（Glacial acetic acid） 甲醇（methanol）国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司国药集团化学试剂有限公司 国药集团化学试剂有限公司 沈阳禹王试剂公司 .2.2 主要仪器和设备 本研究所使用的仪器和设备详见表2-2。 表2-2 使用的仪器设备 仪器设备名称 生产公司 D-37520 型高速冷冻离心机 DL-6M 大容量冷冻离心机 Cary紫外可见分光光度计 HZS-H 水浴振荡器 SIEMENS 冰箱 BS223S 型电子天平 sartorius 普及型 pH 计Dolphin-Doc 凝胶成像系统 电泳仪 TS-1 型脱色摇床611-DI 超纯水系统 Lab dancer 漩涡振荡器 Gilson移液器 SORVALL BIOFUGE STRATOS 公司 长沙湘仪离心机仪器有限公司 美国Varian公司 哈尔滨市东联电子技术开发有限公司 博西华家用电器有限公司 北京赛多利斯仪器系统有限公司 北京赛多利斯仪器系统有限公司 WEALTEC 公司 BIO-RAD 公司 长沙湘仪离心机仪器有限公司 德国Sartorius公司 法国吉尔森公司 金坛市晶玻实验仪器厂 .3 实验操作方法2-3第一次浸提试验表 水平 影响因素 料液比 乙醇浓度（%） 浸提温度（℃） 浸提时间（min） 1 1:10 80 50 60 2 1:10 75 40 45 3 1:8 80 50 60 4 1:8 75 40 45 表2-4 第二次浸提试验表 水平 影响因素 料液比 乙醇浓度（%） 浸提温度（℃） 浸提时间（min） 1 1:10 90 35 30 2 1:10 80 25 20 3 1:8 90 35 30 4 1:8 80 25 20 根据正交表，进行相应操作。 （溶剂中过多水分的存在使得鼓风干燥时产物形成较多氢键，会降低了产物的溶解性。但在蛋白含量优化工艺中，过高的乙醇浓度难以将原料中的可溶性杂质溶出，影响蛋白含量的提升。） 2.3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白鉴定 （1）μl 样品加等体积 2×SDS 凝胶上样缓冲液，吹匀，100℃ 沸水中加热 5 min，吸取 10μl 混合液上样,电泳。。 （2）全自动图像分析系统 Dolphin-DOC进行扫描、分析体操作参照附录。[69]： 取样品 100mg 分散于 10mL 溶液中，室温下搅拌 30min，分散液在 1500r/min 离心 10 min，取 1mL 上清液于试管中，加入 4mL 双缩脲试剂，充分摇匀，在室温下放置30min，于 540nm 处进行比色测定。以牛血清白蛋白做标准曲线。 2.3.2.2 乳化性与乳化稳定性测定[72]： 称取一定量的蛋白产品溶于 60mL 的溶液中，加入20mL 大豆色拉油，在高速组织捣碎机中均质(10000r/min)2min，制成乳状液。准确吸取底部乳状液 0.1mL，放一小烧杯中，立即加入 25mL0.1%SDS溶液，充分摇匀后，以0.1%SDS 溶液做对照，在 500nm 处，测定吸光度值(AOD)，并以乳化指数(EAI=AOD×100) 表示乳化性。15min后，再次测定吸光度值(AOD)，并计算乳化稳定性(ES）：乳化稳定 性(ES)= AOD/AOD×t(t:时间间隔)。改变蛋白液浓度、离子强度和 pH 值，测出不同条件下 的乳化性与乳化稳定性。 2.4 实验结果与分析 2.5 小结 第三章 花生浓缩蛋白的酶解改性工艺及其特性研究 3.1引言 酶法改性是目前食品蛋白质改性的研究重点，具有专一性强、条件温和、无毒副作用等特点，是改善蛋白质功能性质的主要方法。从分子水平看，酶法改性的实质就是切断蛋白质分子的主链或是对蛋白质分子的侧链基团进行修饰，从而引发蛋白质空间结构和理化性质的改变，使蛋白质的功能特性或营养价值得到改善，酶法