胶原纤维染_色.docVIP

胶原纤维染色 胶原纤维是人体中的结缔组织的主要成分，分布在全身的各个部位，组成胶原纤维的主要成分是胶原蛋白。新鲜时呈白色，故一般称为白色纤维。在HE染色中被染为淡红色。它的性质是具有一定韧性及紧固性，因此它能够抵抗一定的牵拉力而不至于撕裂或拉断它们常聚集成粗细不等的束，呈波浪状。胶原纤维由许多根纤细的胶原纤维组成。在电镜下胶原原纤维又由更细的原纤维构成。根据Kramen和Little所进行的电镜研究证实，胶原纤维是特有的，具有横纹的（重复期为650）原纤维。当有病变时这些纤维可发生变形，常出现的就是胶原纤维的坏死，胶原纤维在稀酸里可发生膨胀，变成胶样物。它们能被酸性染料染成深浅不一的粉红色，这些往往跟淀粉样物难以区别。由于它们的屈光率较弱，因而在光学显微镜下，很难与纤维区别。胶原纤维的分子长度约为3000，直径约为14，分子量为300000。一、胶原纤维的组成：1、细胞内合成前胶原蛋白分子，成纤维细胞摄取合成蛋白质所需的氨基酸，包括脯氨酸、赖氨酸和甘氨酸。在粗面内质网的核糖体上按照特定的胶厚mRNA的碱基序列，合成前α-多肽链。后者边合成边进入粗面内质网腔中，并在羟化酶的作用下，将肽链中的脯氨酸和赖氨酸羟化经羟化后，三条前α-多肽链互相缠绕成绳索状的前胶原蛋白分子。溶解状态的前胶原蛋白分子，两端未缠绕，呈球状构形，在粗面内质网腔风或转移到高尔基复合体内加入糖基后，分泌到细胞外。2、厚胶原蛋白分子的细胞外聚合。细胞外的前胶原蛋白分子，在肽内切酶的作用下，切去分子两端球状构表部分，形成厚胶原蛋白分子，粗约1.5nm，长约300nm，厚胶原蛋白分子平行排列聚合成胶原纤维。聚合时，相互平的相邻分子错开1/4分子长度，同一排的分子，菌尾相对并保持一定距离，聚合成束，于是形成具有64nm周期横纹的胶原原纤维。聚合时，分子内，分子间的化学基因进行缩合，交联，增加厚纤维的稳固性。若干胶原原纤维经糖蛋白粘合成粗细子等的胶原纤维。中性自溶型胶原（neutrla-soluble collagen）→醛糖、缩醛类脂/肉豆蔻酸、类脂→不溶型胶原（insoluble collagen）二、胶原纤维的显示：胶原纤维在HE染色法被染成粉红色，除此之外，它还可以用一些阴离子的染料来进行染色，如用淡绿可把它们染为绿色，用甲苯胺蓝可将其染为蓝色，在网状纤维染色中，如不加以处理，它又可被染为棕黄色。常用的特殊染色法有Van Gieson.Masson和Mallary等方法。在免疫细胞化学染色中，胶原纤维由于含的负电荷过多，常导致某些非特异性的染色，应特别注意。（一）.Van Gieson（V.G）染色法I. 试剂的配制：weigert氏苏木素A液： 苏木素 ?1g （haematoxylin）?????无水酒精 100mlB液： 30%三氯化铁 4ml （ferric chloride）??????蒸馏水 95ml?????盐酸 1mlII．Van Gieson氏液A液： 酸性品红 1g（acid fuchsin）?????蒸馏水?? 100mlB液： 苦味酸饱和水溶液，（1.22%）（picric acid）注意事项：1、Weigert氏苏木素临用前取A液和B液等份混合，几个小时内用完，最长不得超过一天。2、苏木素配后经二十多天才能成熟，必须提前配制。3、该液能抵抗弱酸性染液，对已着染的细胞核在酸性染液的作用，不易被脱去颜色，如果不特别深染，则无须分化。4、Van Gieson氏液取B液9ml，加入A液1ml，即可使用。操作方法：（后面的各种方法，如没特别说明，都在室温下进行）1、切片脱蜡至水，2、用Weigert氏苏木素染20min，3、水洗，必要时可分化，4、流水冲洗10min，5、染Van Gieson氏液1min，6、用95%酒精快速分化，7、无水酒精脱水，二甲苯透明，封固。结果：胶原纤维：鲜红色，肌纤维： 黄色，红细胞： 黄色，细胞核： 蓝黑或灰色。注意事项：1、该法染完的切片，较易褪色如需照相，应尽早完成。2、苏木素染液如为棕色或沉淀，应将其抛弃。3、分化用的酒精，应使用95%以上的酒精，低浓度的酒精褪色能力强，容易将着染的红色脱去。4、切片也可以用天青兰苏木素替代Weigert氏苏木素，染核效果基本一样。（二）.Masson氏三色染色法：天青石蓝液的配制：?天青石蓝（Celestin blue B） 1.25g?硫酸铁铵（ferric ammonium sulfate）1.25g?蒸馏水 200ml?甘油（glycerin） 30ml将前两者溶于蒸馏水中，然后煮沸，冷却后过滤，再加入甘油和麝香草酚。?Mayer氏苏木素的配制?苏木素 0.1g?蒸馏水 10