结缔组织多_色染色法.docVIP

第一节 结缔组织多色染色法一、Mallory三色染色法1. 试剂配制（1）重铬酸钾液 重铬酸钾2.5g，醋酸5ml，蒸馏水95ml（2）苯胺蓝桔黄G液 苯胺蓝0.5g，桔黄G2g，磷钨酸1g，蒸馏水100ml（3）酸性复红液 酸性复红0.5g，蒸馏水100ml2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（2）重铬酸钾液10min。（3）蒸馏水冲洗2min，蒸馏水2次。（4）酸性复红液2min，蒸馏稍洗。（5）苯胺蓝液20min，95%乙醇快速分化。（6）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.结果胶原和网状纤维呈蓝色，软骨、粘液、淀粉样变物质呈淡蓝色，神经胶质纤维、肌纤维和酸性颗粒呈红色，髓鞘和红色呈桔红色。4.注意事项（1）酸性复红液易溶解于水，肉眼观察切片上保留一定的红色。（2）苯胺蓝液染色后，用95%乙醇分化时，须用显微镜观察掌握。（3）对陈旧的固定标本，其染色效果较差，可增加染色时间。（4）另张切片，可同时作胶原纤维对照染色而进行鉴别组织成分。二、Masson三色染色法1.试剂配制（1）Masson复合染色液 酸性复红1g，丽春红2g，桔黄G2g，0.25%醋酸300ml。（2）亮绿染色液 高绿SF0.1g，0.2%醋酸100ml。2.染色步骤中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（1）Masson复合染色液5min。（2）0.2%醋酸水溶液稍洗。（3）5%磷钨酸5-10min。（4）0.2%醋酸水溶液浸洗2次。（5）亮绿染色液5min，0.2%醋酸水洗2次。（6）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.结果胶原纤维呈绿色，肌纤维呈红色，红细胞呈桔红色。4.注意事项（1）Masson复合染色液，经磷钨酸分化时须用显微镜控制肌纤维清晰为止。（2）亮绿染料可用苯胺蓝替换，可用来作为对比观察染色的效果。三、显示胶原纤维、网状纤维和弹力纤维的三联染色法（1993年） 1.试剂配制（1）高锰酸钾硫酸液 0.5%高锰酸钾水溶液中加入5ml的硫酸。（2）维多利亚蓝染色液 维多利亚蓝2g，糊精0.5g，间苯二酚4g，蒸馏水200ml。将上述物质混合后加热煮沸，边煮边搅拌，约5min。然后用另一容器取30%三氯化铁水溶液25ml，另行加热煮沸后慢慢倒入上述混合液中继续煮沸3min，不断搅拌溶液呈胶体状。去火冷却过滤，将滤纸上的残渣连同滤纸放在60恒温箱中烤干。残渣呈深蓝色细颗粒状粉末，再溶于400ml的70%乙醇液中。然后加浓盐酸4ml和苯酚5g放置至成熟后使用。（3）丽春红染色S染色液 0.5%丽春红S水溶液15ml，苦味酸饱和水溶液85ml。（4）Gomori氨性银改良液 取5%硝酸银水溶液5ml，滴加浓氨水由棕黑色变清为止，再加入3%氢氧化钠水溶液5ml，此时该液突变紫黑色，这时再加入氨水使之变清晰为止。最后用蒸馏水补足至50ml，盛棕色试剂瓶中，置于冰箱中备用较长时间。2.染色步骤（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。（2）高锰酸钾硫酸液氧化3min后，自来水浸洗后，用2%草酸漂白2min。（3）5%硫酸铁铵1min。（4）Gomori氨性银改良液染1min。（5）蒸馏水洗2次，用15%甲醛液还原1min。（6）蒸馏水洗2次，0.2%氯化金30s，蒸馏水洗1次。（7）70%乙醇浸一次，再浸入维多利亚蓝液中染30min-1h。（8）95%乙醇分化1min左右。（9）浸入蒸馏水中1min后，用丽春红S染色液染色2min。（10）直接用无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。3.结果胶原纤维呈红色，网状纤维呈黑色，弹力纤维呈绿色，肌肉和红细胞呈淡黄色。4.注意事项氨性银液滴染时，要用干净吸管，防止银液污染而发生沉淀。氨性银液作用后的切片不能倾倒，应将蒸馏水冲洗切片上的银液，这样就不会使银液表面挥发的银颗粒而沉积在组织上。第二节 胶 原 纤 维一、胶原纤维的分布和组成成分胶原纤维是结缔组织中的三种纤维之一，分布最为广泛，含量最多。主要分布于真皮、键、韧带、骨、透明软骨、动脉、肠壁、子宫和基底膜等，胶麻纤维具有韧性大，抗拉力强的特点。在弱酸或沸水中可慢慢溶化成胶水，称白明胶。胶原纤维和网状纤维的基本构造相似，都以胶原单位(蛋白质为主的大分子)为基本单位。胶原单位接连和融合形成网状纤维;它是粗约1μm左右的分支状纤维，形成全身组织的支架，在HE染色中看不清楚。但其外面裹着的一层类蛋白，凭借镀银法可以清楚地显示出来，故又称为嗜银纤维。胶原纤维单位主要由纤维母细胞合成。其他如平滑肌细胞等也能产生。胶原单位的形成开始于细胞的粗面内质网，合成比构成胶原单位的α肽链更长的前α肽链，