微生物多糖提取与纯化.pptVIP

采用热酚水法提取肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7 的脂多糖(LPS)，经浓缩酶解，离心分离得纯化LPS。 O157:H7 菌体的获得：对保藏菌株活化后，玻片凝集法鉴定其血清型，再采用平皿划线培养法挑取单菌落，转接至营养肉汤培养基，3 7 ℃下摇床培养。收集对数生长期菌体，离心沉淀(3500r/min，15min)后，用4 倍体积生理盐水洗剂2次，蒸馏水洗剂1 次，用无热原水按1:3 比例(1g 湿菌体悬浮于3ml 无热原水中)悬浮。 LPS 粗品的制备：菌悬液反复冻融三次后，与等量9 0 % 苯酚共同加热至68℃后混合，剧烈搅拌30min 后，冰浴至2℃离心(4℃，3000 × g，20min)。酚相加等体积无热原水重复洗涤2 次，收集水相溶液装于透析袋中，流水透析12h去酚，再蒸馏水透析60h(FeCl3 检测无紫色出现为止)，可用50% 聚乙二醇6000 浓缩至1/4，即得LPS 粗品。 LPS 的纯化：浓缩后粗LPS中加DNase和RNase各50μg/ml，37℃下酶解4h，100℃水浴加热10min，冷却至室温后离心(1500r/min，30min)，弃沉淀，于上清中加2 倍体积丙酮，沉淀后既可获得纯化LPS 。 肠炎沙门氏菌脂多糖的提取与制备 沙门氏菌菌体裂解后可释放内毒素，英美学者认为内毒素就是脂多糖 (Lipopolysaccharide