第02章核酸的结构与功能4技术总结.ppt

第二章核酸的结构与功能 Structure and Function of Nucleic Acid 碱基的互变异构体 定义 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 核酸的酸碱及溶解度性质 核酸为多元酸，具有较强的酸性。 核酸的高分子性质 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA 沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降的速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。 第五节 核酸酶 Nuclease 1868年 Fridrich Miescher 从脓细胞中提取核素。 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质。 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构。 1968年 Nirenberg发现遗传密码。 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶。 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA测序方法。 1985年 Mullis发明PCR技术。 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP)。 1994年 中国人类基因组计划启动。 2001年 美英等国完成人类基因组计划。 名词解释 deoxyribonucleic acid, DNA ribonucleic acid, RNA ribonucleotide phosphodiester bond double helix complementary base pair nucleosome hnRNA anticodon open reading frame, ORF RNA interference，RNAi heteroduplex melting temperature，Tm 思考题 试述DNA的分子结构特点 试述DNA的生物学功能 试述核小体的组成 试述三种主要RNA的生物学功能 试述核酸分子杂交技术的实际应用 核酸分子杂交 研究DNA分子中某一种基因的位置。 监定两种核酸分子间的序列相似性。 检测某些专一序列在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切割部位不同 核酸内切酶：分为限制性核酸内切酶和非特异性限制性核酸内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或3′→5′核酸外切酶。 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶 5’ 5’ 3’ 3’ 外切位点 外切位点 内切位点 内切位点 参与DNA的合成、修复以及RNA的剪接。 清除多余的、结构和功能异常的核酸，以及侵入细胞的外源性核酸。 降解食物中的核酸。 体外重组DNA技术中的重要工具酶 。 核酸酶的功能 核酸研究的发展简史 （三）mRNA依照自身的碱基顺序指导蛋白质氨基酸顺序的合成 从mRNA分子5末端起的第一个AUG开始，每3个核苷酸为一组称为密码子(codon)或三联体密码(triplet code)。 AUG被称为起始密码子；决定肽链终止的密码子则称为终止密码子。 位于起始密码子和终止密码子之间的核苷酸序列称为开放阅读框(open reading frame, ORF)，决定了多肽链的氨基酸序列 。 （四）mRNA的成熟过程是hnRNA的剪接过程 卵清蛋白mRNA的成熟 转运RNA(transfer RNA, tRNA)在蛋白质合成过程中作为各种氨基酸的载体, 将氨基酸转呈给mRNA。 由74～95核苷酸组成； 占细胞总RNA的15%； 具有很好的稳定性。 二、tRNA是蛋白质合成中的氨基酸载体 （一）tRNA中含有多种稀有碱基 tRNA具有局部的茎环(stem-loop)结构或发卡(hairpin)结构。 （二）tRNA具有茎环结构 tRNA的二级结构 ——三叶草形 氨基酸臂 DHU环 反密码环 TψC环 附加叉 tRNA的倒L三级结构 tRNA的3?-末端都是以CCA结尾。 3?-末端的A与氨基酸共价连结，tRNA成为了氨基酸的载体。 不同的tRNA可以结合不同的氨基酸。 （三）tRNA的3?-末端连接氨基酸 tRNA的反密码子环上有一个由三个核苷酸构成的反密码子(anticodon)。 tRNA上的反密码子依照碱基互补的原则识别mRNA上的密码子。 （四）tRNA的反密码子识别mRNA的密码子 核蛋白体RNA(ribosomal RNA，rRNA)是细胞内含量最多的RNA(80％)。 rRNA与核蛋白体蛋白结合组成核蛋白体(ribosome)，为蛋白质的合成提供场所。 三、以rRNA为组分的核蛋白体是蛋白质合成的场所 核蛋白体的组成 占总重量的3