生物显口微技术讲义.docVIP

生物显微技术讲义 唐山师范学院生命科学系 陈超 石洪凌 2005.3 前言 生物显微技术是高等院校生物系各专业的基础课,包含生物材料固定技术、生物染色技术、各种显微切片制作技术、显微化学技术显微摄影技术。通过这门课的学习，希望能够帮助大家加强生物实验的技能。使学生掌握制作动、植物显微切片的技术,掌握使用光学显微镜及进行显微摄影所必备的基本理论、基本知识和基本技术。 本《生物显微技术大实验》是为了配合这门课的教学，在参考了国内一些相关教材的基础上，结合本教研室的历年实验经验与心得而编写的，仅供唐山师范学院生命科学系学生使用。生物显微技术的内容在其他教材中叙述比较零乱，没有统一的整体性。本指导在结合我系教学安排和实验的前提下，有针对性的安排了生物显微技术的理论教授和实验指导。内容主要包括石蜡切片的制作、显微摄影知识、数码显微镜及软件的使用。 由于编者业务水平和工作经验所限，虽然做了大量努力，书中难免还会存在缺点和不足。为此切盼广大师生在使用本书过程中能提出批评和建议，以备在以后的日子里改进和提高。 编者 2005年1月于唐山师范学院 目录 第一章生物制片…………………………………………………..4 第一节前期准备………………………………………………..4 第二节生物制片分类…………………………………………..8 第三节石蜡切片 ……………………………………………..10 第二章显微摄影技术…………………………………………....37 第三章暗室技术…………………………………………………48 第一节感光材料…………………………................................48 附 彩色显微摄影……………53 第二节暗房工艺…………………………………………………57 第四章数码显微摄影……………………………………………64 实验一 徒手切片与整体制片法………. ……………………..66 实验二 1、石蜡切片技术—固定、染色、返蓝………………70 2、石蜡切片技术—脱水、透明、浸蜡、包埋………..72 3、石蜡切片技术—切片、粘片、脱蜡、透明、封藏 74 实验三 显微摄影及暗室技术…………………………………78 实验四 数码显微摄影及研究分析软件的使用 …………………88 实验五 所作切片的观察照相、提交作业 ………………………99 第一章 生物制片 第一节 前期准备 一、玻璃器皿的清洗： （一）生物学实验使用的玻璃器皿及玻片均要清洗干净, 应以壁面被水均匀润湿而无水珠为标准。 表1-1一般器皿的洗涤方法 玻璃器皿 可选用洗涤液及洗涤方法 新购置未用过的器皿 一般使用过的器皿 沾有不溶物或刷洗不易达到的器皿 沾有较多凡士林或其他油污的器皿 沾有油脂物质的器皿 洗衣粉、洗涤剂煮洗，或重铬酸钾洗液浸洗30分钟 洗衣粉、洗涤剂刷洗 重铬酸钾洗液浸泡 先用二甲苯或汽油擦洗，再用浓碱或热洗涤剂刷洗 热洗涤剂，或30~40%的碱液 玻璃器皿经洗涤液清洗后→自来水冲洗→蒸馏水冲洗→倒放于大张滤纸上晾干或玻璃仪器烘干器烘干。 （二）洗液配法：重铬酸钾 20g 浓硫酸 100ml 清水 100ml 先将重铬酸钾溶于水中，在一滴滴加入浓硫酸，边加边搅拌，颜色为红褐色放于玻璃容器内可反复使用，一直到颜色变为蓝黑色为止。 （三）新旧载玻片及盖玻片的清洗： 1．新的：2%盐酸酒精（95%酒精100份加浓盐酸2份）浸泡几个小时→流水冲洗干净→95%酒精中待用。 2.旧的：没用树胶封片的：洗衣粉煮沸5-10分钟→清水冲洗→洗液30分钟→流水冲洗→蒸馏水洗净→95%酒精中待用。 3.树胶封片的玻片：二甲苯浸泡、洗净→95%酒精中待用。 二、溶液的配制： （一）百分比浓度 :质量百分比浓度。即100g溶液中所含溶质的克数。 1.稀溶液的配置： 例1：1%的番红水溶液—即将番红1克溶解于100 ml的蒸馏水中。 例2：0.1%固绿酒精溶液—即将固绿0.1克溶解于100ml的95%酒精中。 2.浓溶液的配置：配置高浓度的溶液，应在100ml的水中减去溶质重量的水。 例：15%NaCL称取15gNaCL,溶于85ml水中。 （二）摩尔浓度：1升溶液中所含溶质的mol数。用M表示。 例：配制500ml 2M NaCO3溶液 称取2×106×0.5=106g NaCO3溶于500ml水中。 （三）当量浓度：1升溶液中所含溶质的克当量数。用N表示。 当量（E）与分子量（MW）的关系：E=MW/n 其中酸的n为酸分子中可被金属取代