第3章口 蛋白质的结构与功能quan.ppt

蛋白质的结构与功能 蛋白质(protein)是由许多氨基酸(amino acids)通过肽键(peptide bond)相连形成的高分子含氮化合物。 蛋白质的生物学重要性 1. 蛋白质是生物体的重要组成成分 2. 蛋白质具有重要的生物学功能 　1）作为生物催化剂 　2）代谢调节作用 　3）免疫保护作用 　4）物质的转运和存储 　5）运动与支持作用 　6）参与细胞间信息传递 3. 氧化供能 蛋白质的分子组成The Molecular Component of Protein ? 蛋白质的元素组成 主要有C、H、O、N和S。 有些蛋白质含有少量P或金属元素Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Mo，个别蛋白质还含有 I 。 ? 蛋白质元素组成的特点 通过样品含氮量计算蛋白质含量的公式： 一、氨基酸 ——蛋白质的基本组成单位 存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种，且均属 L-?-氨基酸（甘氨酸除外）。 非极性R基团氨基酸 不带电荷极性R基团氨基酸 带电荷R基团氨基酸 　 习惯分类方法 芳香族氨基酸：Trp色氨酸、Tyr络氨酸、Phe苯丙氨酸 含羟基氨基酸：Ser丝氨酸、Thr苏氨酸、Tyr络氨酸 含硫氨基酸：Cys半胱氨酸、Met蛋氨酸 杂环族氨基酸：His组氨酸 杂环族亚氨基酸：Pro脯氨酸 支链氨基酸：Val缬氨酸、Leu亮氨酸、Ile异亮氨酸 　 几种特殊氨基酸 Gly甘氨酸：无手性碳原子。 Pro脯氨酸：为环状亚氨基酸。 Cys半胱氨酸：可形成二硫键。 硒代半胱氨酸和吡咯赖氨酸 Selenocysteine: encoded by the RNA nucleotide triplet UGA found in Archaea, eubacteria and animals including mammals. Pyrrolysine: encoded by the RNA nucleotide triplet UAG, found in Archaea, and eubacteria. Science (2002) vol. 296, 1409 氨基酸的两性解离性质及等电点 氨基酸等电点的计算 氨基酸光学性质 TrpTyrPhe的 紫外吸收光谱 氨基酸与2,4一二硝基氟苯(DNFB)的反应（sanger反应） 氨基酸与苯异硫氰酯（PITC）的反应（Edman反应） 二、肽 多肽链 （二） 几种生物活性肽 1. 谷胱甘肽(glutathione, GSH) 三、蛋白质的分类 蛋白质的分子结构The Molecular Structure of Protein 超二级结构类型 卵溶菌酶的三级结构中的两个结构域 （二）血红蛋白的构象变化与结合氧 Hb与Mb一样能可逆地与O2结合， Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。 * 协同效应(cooperativity) 一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。 促进作用称为正协同效应 (positive cooperativity) 抑制作用称为负协同效应 (negative cooperativity) 变构效应(allosteric effect) 凡蛋白质（或亚基）因与某小分子物质相互作用而发生构象变化，导致蛋白质（或亚基）功能的变化，称为蛋白质的变构效应。 3. Lowry法:是双缩脲法的发展 蛋白质与酚试剂反应生成蓝色物质，该法称福林-酚法，又称Lowry法，是蛋白质定量的经典方法。 蛋白质—铜络合物磷钼酸—磷钨酸(FolIn试剂)还原，混合物深蓝色(磷钼蓝和磷钨蓝混合物) 4. Bradford法: 蛋白质与考马斯亮兰G-250结合生成蓝色的物质，在595nm处有最大光吸收，是目前蛋白质定量的常用方法，称为染料结合分析法或Bradford法。 5. BCA法 :BCA(bicinchoninic acid) BCA与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂，混合一起即成为苹果绿，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+，一个Cu+螯合二个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿形成紫色复合物，最大光吸收强度与蛋白质浓度成正比。 二、蛋白质的分离和纯化 抽提 抽提的含义： 抽提通常是指用适当的溶剂和方法从原材料中把有效成分分离出来的过程。 经过处理的原材料中的有效成分可用缓冲液、稀酸、稀碱、或有机溶剂（如丙酮、乙醇）等抽提，有时还可用蒸馏