第5章口 酶-1.pptVIP

第五章 酶(enzyme) (二)、国际系统命名法 系统名应包括底物名称、反应性质以及反应名称，最后加一“酶”字； 底物名称间以“:”分隔(作用物之一为水，可略去)； 国际酶学委员会从习惯名称中选定一个简便实用的推荐名称； 例：编号EC 1.4.1.3(大类、亚类、亚亚类、序号)： 　　　推荐名称：谷氨酸脱氢酶 　　　系统名称：L-谷氨酸:NAD+氧化还原酶 　　　催化反应： 　　 L-谷氨酸＋H2O＋NAD+　　　　?-酮戊二酸＋NH3＋ NADH 例如，谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。 例如，脂肪酶(Lipase)催化的脂的水解反应： 对热不稳定; 两性电解质; 变性因素与蛋白质相同; 有胶体特性; 蛋白水解酶使之失活; 已获得结晶的酶; 序列分析。 当底物或底物以外的物质与酶非共价的结合后，可改变酶的构象，进而改变酶的催化活性，这种效应称为别构效应。 受别构效应调节的酶称别构酶；别构酶通常为代谢途径的起始关键酶。 引起别构效应的物质称为别构效应剂；凡使酶活性增强的效应剂称别构激活剂；凡使酶活性减弱的效应剂称别构抑制剂。别构激活剂常常是酶的底物，别构抑制剂一般是代谢反应序列的终产物。 酶加速其所催化的化学反应的能力称为酶的活力(activity)。 测定的酶活力→测定酶促反应速度。 酶(活力)单位：在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物所需的酶量。 一个酶单位(U):在最适的反应条件(30℃)下，1分钟内转化1?mol底物的酶量或是转化底物中1?mol有关基团的酶量。即 1U=1?mol/min 1、酶的粗提 从动植物细胞中粗提酶：破碎动物细胞(研磨、匀浆、反复冻融等)→缓冲液提取 从细菌中粗提酶：破碎细菌(超声波、溶菌酶、化学试剂等) →缓冲液提取 1、某酶溶液中滴加氯化汞，该酶不再有活性，但如预先加入巯基乙醇或二硫苏糖醇(一种还原剂)，酶能保持活性。请解释此现象。 2、酶溶液加热时，随着时间的推移，酶的催化活性逐渐丧失。这是由于加热导致天然酶的构象去折叠。己糖激酶溶液维持在45℃下12min后，活性丧失50％。但是若己糖激酶与大量的底物葡萄糖共同维持在45℃下12min，则活性丧失仅为3％。请解释此现象。 3、新掰下的玉米的甜味是由于玉米粒中的糖浓度高。可是掰下的玉米贮存几天后就不那么甜了，因为50％糖已经转化为淀粉。如果将新鲜玉米去掉外皮后浸人沸水几分钟，然后于冷水中冷却，储存在冰箱中可保持其甜味。这是什么道理? 4、下表是一种酶的各个纯化步骤的总蛋白和总活性单位数： 纯化步骤 总蛋白／mg 总活力单位数 　　1．粗提 20 000 4 000 000 　　2．盐沉淀 5 000 3 000 000 　　3．pH沉淀 4 000 1 000 000 　　4．离子交换层析 200 800 000 　　5．亲和层析 50 750 000 　　6．凝胶过滤层析 45 675 000 (a)从表中给出的信息计算每一纯化步骤得到的酶溶液的比活力。 (b)哪一纯化步骤最有效(即相对纯度增加最大)? (c)哪一纯化步骤效率最低? (d)按照表中的6个步骤纯化的酶是纯的酶，表中结果是否有指示?有没有别的方法评价酶的纯度? 作业2 从肝细胞中提取的一种蛋白水解酶的粗提液300mL，含有150mg蛋白质，总活力为360单位。经过一系列纯化步骤后得到的4mL酶制品(含有0.08mg蛋白)，总活力为288单位。整个纯化过程纯化了多少倍？ I和S在结构上一般无相似之处，I和S同时结合在E的不同部位,即I和E结合的位置不是S和E的结合位,而是与酶分子上结合基团以外的化学基团结合，这种结合并不影响底物和酶的结合，增加底物浓度并不能减少I对酶的抑制程度。 某些需要金属离子维持活性的酶,也可能被非竟争性抑制,如F-、CN-等金属络合剂可与金属酶中的金属离子络合,使酶的活性受到抑制。 ? 非竞争性抑制的双倒数图形特征 —— 1 v = —— km Vm —— [S] 1 + — Vm 1 1+ [I] Ki 1+ [I] Ki 1 [S] 3．反竞争性抑制(uncompetitive inhibition) (自学) 抑制剂不能与游离酶结合，但可与ES复合物结合并阻止产物生成，使酶的催化活性降低，称酶的反竞争性抑制。 v = ————