第10章+酶的作用机制和酶的调节技术总结.ppt

或者称活性中心（active center) ——与酶活力直接相关的区域 结合中心：与S结合 决定酶促反应的专一性 催化中心：促进S发生化学变化 决定酶促反应的性质 必需基团：与酶的催化活性直接相关的化学基团 常见：His咪唑基、Ser-OH、 Gluγ-COOH、Cys-SH、Asp-COOH （一） 酶活性部位的特点 （二）、研究酶活性部位的方法 （二）底物的形变和诱导契合 契合后，诱导“电子云形变” 酶活性中心瞬时地向反应物提供H+/H+受体以稳定过渡态，加速反应的一类催化机制。 1、需要金属离子的酶 （几乎1/3的酶催化活性需要金属离子） （1） 金属酶 (metalloenzyme) 含紧密结合的金属离子（多为过渡金属离子如：Fe2+，Fe3+,Cu2+,Zn2+,Mn2+,Co3+） （2）金属-激活酶 ( metal-activited enzyme) 含松散结合的金属离子（多为碱和碱土金属离子如：Na+、K+、Mg2+、Ca2+。 2、金属离子以3种主要途径参加催化过程 A、参与底物反应的定向 B、通过价态改变参与电子转移 C、通过静电稳定/屏蔽负电荷 酶的活性中心部位，一般都含有多个起催化作用的基团，这些基团在空间有特殊的排列和取向，可以对底物价键的形变和极化及调整底物基团的位置等起到协同作用，从而使底物达到最佳反应状态。 四、酶催化反应机制的实例 （一）溶菌酶（lysozyme） 碱催化 使肽键失稳 胰蛋白酶 五、酶活性的调节控制 （一）别构调控（allosteric regulation） 定义 别构调节：酶分子的非催化部位与某些化合物可逆地非共价结合后发生构象的改变，进而改变酶活性状态。 别构酶：具有别构现象的酶。 别构剂：能使酶分子发生别构作用的物 质。通常为小分子代谢物或辅因子 3、 别构酶的性质 胰蛋白酶的激活 酶 酶-P 六、同工酶（isoenzyme） 别 别 别 别 别 别 别 其他 异促反应 负协同效应 异促反应 正协同效应 同促反应 负协同效应 抑制 促进 底物 同促反应 正协同效应 效应物（调节物、别构剂） 对酶活性影响 ATP 别构激活剂 CTP 别构抑制剂 1. 天冬氨酸转氨甲酰酶（ATCase) 调节亚基 催化亚基 ATCase由催化亚基和调节亚基构成： 大亚基为催化亚基，有催化活性， 不与ATP和CTP结合； 小亚基为调节亚基，无催化活性， 能与ATP和CTP结合; 2. 3－磷酸甘油醛脱氢酶 是糖分解途径中的重要酶。与供能有关。 具有负协同效应的别构酶代表 该酶含4个亚基，可和4个NAD+结合，但结合常数不相同，酶结合NAD+后，发生构象变化。 即使NAD+浓度很低，酶也能结合，但是结合两个NAD+后，再要结合第三/四个NAD+就很难，需要提高浓度至少两个数量级。 实验结果表明，酶只能结合两分子NAD+，酶结合NAD+的位点，只有一半起反应 ——称为半位反应性 这是一种极端负协同效应。说明在一定底物浓度范围内，底物浓度的变化不足以影响酶反应速率。这是负协同别构酶的特点。 别构激活剂 别构抑制剂 （1）多亚基 一部分亚基有活性中心， 另一部分有别构调节中心 S形曲线（正协同） 表观双曲线（负协同效应） （2）别构酶的动力学 协同指数CI（cooperativity index）又称为饱和比值Rs（saturation ratio）可用于鉴别不同的协同作用以及协同作用的程度。 n 代表协同系数（Hill系数） 典型的米氏酶Rs＝81 具正协同效应别构酶Rs81，愈小效应愈显著； 具负协同效应别构酶Rs81，愈大效应愈显著。 n =1 n 1 n 1 （3）K型效应物和V型效应物： K0.5：别构酶催化反应达到1/2 Vmax时的[S] 改变K0.5不改变Vmax：K型效应物 改变Vmax，不改变K0.5 ：V型效应物 A为K型效应物 B为V型效应物 +.加激活剂；-.加抑制剂 别构酶经加热或用化学试剂等处理，可引起别构酶解离，失去调节活性。